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- 文献和实验
- 技术资料
- 适应物种:
human
- 应用范围:
elisa
- 保存条件:
-20
- 宿主:
rabbit
- 供应商:
佰泰科
- 抗原:
人胶原蛋白Ⅳ
- 抗体英文名:
Rabbit anti-Collagen Type Ⅳ,IgG
- 是否单克隆:
多克隆
- 库存:
10000
- 保质期:
3年
- 抗原来源:
human
- 级别:
亲和纯
- 规格:
1mg
|
Pab rabbit×human
ELISA,RIA, IHC Affinity Purified save;-20℃ Specificity: Recognizes human collagen type IV:100%;Human collagen types I,II:≤0.1%; Human collagen types III,V:≤0.1%; Human Fibronectin:≤0.1%; Mouse Laminin:≤0.1%
多克隆抗体,兔抗人,应用于ELISA,RIA, IHC等实验。
亲和纯化,-20℃保存 特异性:全面识别人胶原蛋白IV型,交叉反应:人胶原蛋白I、II型:≤0.1%;人胶原蛋白III型:≤0.1%;人纤维连接蛋白:≤0.1%;小鼠层粘蛋白:≤0.1%。 |
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。当前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是当前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
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胶原蛋白是细胞外间质的主要成分,占人体总蛋白的1/3胶原蛋白具有广泛的生物活性,参与细胞增殖、运动、分化、以及肿瘤细胞的转移等病理过程。胶原提取物可作为某些特殊细胞培养的基质,模拟细胞的体内环境。胶原可以作为整形及美容的填充物材料,也可用于人造血管的预凝,在许多疾病的诊断与研究(肝硬化、肺纤维化、硬皮病等)中,胶原的提取及分析已成为必要的手段。 目前已发现的胶原类型有13种,结构与功能较清楚的有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原。不同类型胶原在体内的分布
一、原理与意义免疫荧光组织(细胞)化学染色方法——直接法,是一种荧光抗体染色法。该方法比较简单,适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白质抗原如肾、皮肤的检查和研究。此法每种荧光抗体只能检查一种相应的抗原,特异性高而敏感性较低。二、操作流程1、染色:切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),在室温或37℃染色30min,切片置入能保持潮湿的染色盒内,防止干燥。2、洗片:倾去存留的荧光抗体,将切片浸入pH
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