末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)说明书

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)说明书，产品信息：

类别：工具酶

英文名：Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

产品名	产品编号	包装规格
末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)	YT512	500U

英文名：Terminal Deoxynucleotidyl Transferase

产地：国产|进口

规格：500U

本酶是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3"羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的最短长度为3个核苷酸。

 

用途：寡核苷酸或DNA 3"羟基末端标记；DNA末端加尾(DNA tailing)；5"-RACE；合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。

来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。

活性定义：37℃60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3"羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。

酶活性检测条件：200mM potassiu*(代"m") cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。

酶储存溶液：100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。

Reaction Buffer(5X)：0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassiu*(代"m") cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。

失活或抑制：70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、*离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。

储存条件：-20℃。

 

使用说明：

 

1. DNA 3’末端标记：

a. 参考如下表格设置反应体系：

待标记DNA————————————————————10 pmol of 3"-termini

Reaction Buffer (5X) ——————————————10µl

[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol (3000Ci/mmol)————1.85 MBq (50µCi)

TdT (20U/µl) ——————————————————2µl

补充无核酸酶的去离子水 —————————————至50µl

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 37℃孵育15分钟。

d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。

说明：标记的效率和3’羟基末端的类型有关，3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。

 

2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：

a. 参考下表格设置反应体系：

DNA片段 ————————————————————1 pmol of 3"-termini

Reaction Buffer (5X)——————————————4µl

dATP or dTTP——————————————————130pmol

或 dGTP or dCTP (四种中通常只需加入一种)————60pmol

TdT (20U/µl)——————————————————1.5µl

补充无核酸酶的去离子水—————————————至20µl

b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

c. 37℃孵育15分钟。

d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。

说明：在上述反应条件下，每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。

 

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)说明书专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
YT321	抑制剂激活剂	HDAC抑制剂(组蛋白去乙酰化酶抑制剂)(丁酸*)(Sodium Butyrate)
YT559	酶和辅酶	N-乙酰*基葡萄糖转移酶
YT163	其他培养基	多聚L-赖*酸溶液
YT224	凝胶迁移EMSA	HIF-1α凝胶迁移探针(10μM)
YT341	抑制剂激活剂	MDM2拮抗剂(Nutlin-3)
YT347	抑制剂激活剂	FRAP/mTOR抑制剂(Rapamycin)
YT428	其他培养基	*苄青霉素*(细菌培养用)
YT192	凝胶迁移EMSA	洗涤液(5X，YT190专用)
YT817	一抗	LKB1抗体
YT842	一抗	磷酸化Rb(Ser807/811)抗体
YT481	克隆与表达	N端His标签融合蛋白质粒
YT149	细胞凋亡与增殖	罗丹明123
YT356	抑制剂激活剂	PI3K抑制剂(Wortmannin)
YT704	一抗	兔抗cMet抗体
YT571	酶和辅酶	胆碱激酶
YT213	凝胶迁移EMSA	β-Catenin/TCF凝胶迁移探针(1.75μM)
YT547	酶和辅酶	丙*酸脱*酶
YT622	蛋白质研究	彩色预染蛋白分子量标准(15-120kD)
YT099	免疫检测	Cy3抗大鼠免疫荧光染色试剂盒
YT603	酶和辅酶	果糖异构酶
YT102	免疫检测	Alexa Fluor 350抗兔免疫荧光染色试剂盒
YT199	凝胶迁移EMSA	AP2凝胶迁移探针(10μM)
YT436	其他培养基	胰蛋白胨
YT330	抑制剂激活剂	出核转运抑制剂(Leptomycin B)
YT917	抑制剂激活剂	TLR4激活剂(超纯LPS)
YT304	抑制剂激活剂	抗氧化剂Lipoic acid(硫辛酸)

 

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