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- 天根
- 中国
- FP314-01
- 2026年07月24日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
充足
- 供应商：
天根
- 规格：
50 μl×50 次
本制品是采用探针法(TaqMan® , Molecular Beacon等)进行一步法RT-qPCR的专用试剂。使用本制品进行Real Time One Step RT-qPCR反应可在同一反应管内连续进行，操作简单，避免了样品间交叉污染的同时也提高了检测的灵敏度。
本试剂盒中的25×FastKing Enzyme Mix为TIANGEN新型逆转录酶(King RTase)、新型抗体修饰的热启动Taq DNA聚合酶及RNase Inhibitor的预混Mix形式，其中的King RTase是分子改造后的新型逆转录酶，特别增加了疏水motif，具有更强的RNA亲和性和热稳定性，提高了该酶的逆转录效率和对具有复杂二级结构RNA模板的延伸能力；PCR过程中采用了性能优良的新型热启动 Taq DNA聚合酶，使得逆转录后的PCR反应具更高的扩增效率和特异性。另外，本产品中的2×FastKing One Step Probe RT-qPCR Master Mix是专门为上述两种关键酶而优化的新型反应体系，其中包含必要离子组分dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂，可保证King RTase和新型热启动 Taq DNA聚合酶在整个一步法反应过程中发挥最大功效。
本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对多种高低丰度的靶基因进行准确定量检测，重复性好，可信度高。
产品特点
反应灵敏高效：性能优良的逆转录酶和Taq酶保证了极高的反应效率；
操作简单快速：双组分的产品形式使得操作过程变得简单快速；
解决复杂模板：通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板；
样品普适性好：对不同物种来源及杂质较多的RNA模板的适用性高。
需自备
1. 引物及探针；
2. 模板；
3.一次性手套及其它耗材；
适用范围
RT-qPCR技术可用于检测样本中目的基因表达水平及RNA病毒的含量。
储存条件
请将该试剂盒置于-20℃保存，保质期1年。
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文献和实验15sec，40个循环。实验结果 用小鼠肝脏组织RNA直接进行一步法荧光定量PCR；RNA经反转录成cDNA后分别用BioTeke试剂和T公司试剂同时进行两步法荧光定量PCR结果如图1。 两公司试剂同时在小鼠肝脏组织通过两步法荧光定量PCR试剂扩增和山大实验室所提供cDNA及引物扩增结果如图2。扩增的小鼠肝脏样品熔解曲线较差，而山东大学实验室所提供的cDNA和引物进行的扩增则完好。原因为由于长途携带引物和cDNA，保护措施不佳，造成引物和cDNA部分降解。 小鼠肝脏组织RNA经提取后直接
Probe PCR/RT-PCR也是一个基于探针的定量PCR通用试剂盒。酶自然也是选择严格的Hotstart酶，试剂盒同时提供荧光内参、dNTP和优化缓冲液，价格要30元/次反应（50ul，如果你把反应体积减少到25ul，就可以将成本再减半），如果你是生物通新闻栏目的幸运读者能拿到最近生物通送出的优惠券，那几乎可以又便宜一半。如果你要做Multiplex多重PCR，或者同管内检测目的基因和管家基因，那么你还是不要再幻想自己配试剂了，QuantiTect Multiplex PCR应该是更好
所特有的，下游引物为通用引物就可以了。 荧光定量PCR检测方法有SYBR Green染料法和TaqMan探针法。前者需要调整引物浓度以及引物扩增效率，把引物二聚体调整到越小越好；探针法则需要设计荧光探针，这其中由于MGB探针需要碱基数量少和特异性好的特点而被推荐。 探针设计位置有3个：完全与miRNA序列相同、在miRNA与RT引物的交叉点、完全在RT引物上；这其中又有正向和反向互补两种情况。至于探针要设计在那个位置，根据自己试验情况而定，本人以为效果都差不多。 四、试验操作流程
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