SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒品牌
英文名：SuperTOPO Blunt Cloning Kit
产地：国产|进口
规格：25次
品牌：百奥莱博
本试剂盒是基于Topoisomerase能够在几秒钟之内高速连接DNA片段的原理开发的无背景克隆试剂盒，它使用了本公司通过定点突变改良的TOPO酶，连接效率比野生型更高。

产品特点：
1.高效快速，连接反应几乎在几秒钟内完成，连接率几乎达到100%。
2.适用于pfu、KOD等高保真聚合酶扩增的平末端片段的克隆。
3. 无杂带或引物二聚体的PCR扩增产物可以不经过纯化直接用于连接反应。
4. 零背景，无需IPTG-X-Gal蓝白斑筛选，故不需要IPTG-X-Gal培养基。
5. 本试剂盒按10μL标准反应体系，有25次和50次两种规格包装供选择。
6. 提供含Amp和Kan两种抗性的载体供选择(BTN160684-25A是含Amp抗性TOPO载体，BTN160684-25K是含Kan抗性TOPO载体)。

试剂盒组成：

 

成分	规格
SuperTOPO-Amp Blunt载体	25μl(BTN160684-25A)
SuperTOPO-Kan Blunt载体	25μl(BTN160684-25K)
连接缓冲液	25μl
M13F引物	50μl
M13R引物	50μl
超纯水	1ml
说明书	1份

注意：BTN160684-25A提供SuperTOPO-Amp Blunt载体，BTN160684-25K提供SuperTOPO-Kan Blunt载体。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 如果是PCR 制备插入片段，所用引物不能磷酸化，使用pfu、KOD等产生平末端片段的高保真DNA聚合酶。为保证扩增产物的完整性，PCR循环结束后，再延伸5-10分钟，确保片段延伸完全。
2.电泳检测并相对定量PCR片段(跟DNA marker 比较)。根据插入片段长度和下表确定每次连接反应需要的最佳用量：

插入片段长度	最佳用量
100-1000bp	20-50 ng
1000-2000bp	50-100 ng
2000-5000bp	100-200 ng

3.在一个干净的塑料离心管中，室温下(不要放在冰上)设置如下连接反应体系：

成分	用量
纯化后的PCR产物	不超过8μl(详见注意事项)
SuperTOPO-Amp Blunt载体或 SuperTOPO-Kan Blunt载体	1μl
连接缓冲液	1μl
超纯水	补到10μL

注意：如果使用未经纯化的PCR产物，则需要加入量不能超过1μL，否则PCR 体系会干扰连接体系。
4. 轻柔吹打混匀后，短暂离心，常温(20-30℃)放置0-5分钟。如果在冬天室温低于20℃，建议使用25℃水浴或金属浴。注意：连接时间超过5分钟的话连接效率会降低。
5. 如果当天不转化，可以将离心管放-20℃保存。如果转化，则取5μL连接液加到50-100μL 刚刚融化的感受态细胞中，轻柔混匀。注意：本产品要求感受态细胞的转化效率不得低于5×10E7cfu/ug。
6. 如果片段长度小于2Kb，则不需要冰浴和热激，直接在离心管中加入500μL 不含抗菌素的SOC或LB培养基，然后取200μL涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μl左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-Amp)或Kan(对SuperTOPO-Kan)的培养皿上，37℃过夜培养。
7. 如果片段长度长于2Kb，则按常规转化方式，先冰浴2-30分钟，然后42℃热激30秒，冰上防放置2分钟，再在离心管中加入500μl 不含抗菌素的SOC或LB培养基，37℃ 250rpm培养60分钟，然后取200μL 涂盘。也可以先3000g离心2分钟后，弃掉大部分上清，只留约100μL左右，然后重悬细菌后全部涂盘在含Amp(对SuperTOPO-AmpBlunt载体)或Kan(对SuperTOPO-Kan Blunt载体)的培养皿上，37℃过夜培养。
8. 用M13F/M13R通用引物进行菌落PCR或直接测序来鉴定重组子。

我公司的SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·Phusion DNA聚合酶
编号：BTN130429
英文名称：Phusion DNA Polymerase
规格：100U
本产品是Phusion DNA Polymerase基因经过原核表达，并经多次纯化分离得到。该酶是由高保真Pfu DNA聚合酶和独特的双链DNA结合蛋白Sso7d融合而成，其结构示意图如下：


产品特点：
1．极强的DNA 持续合成能力，合成DNA 能力分别是Pfu DNA聚合酶和Taq DNA聚合酶的10倍和2倍。
2．快速，相比常用的DNA聚合酶，合成时间大大缩短，延伸速率为15-30s/kb。
3．可以短时间内高效、高保真扩增长片段DNA，最长可以扩增20Kb。
4．具有 5´-3´和3´-5´核酸外切酶活性，是目前保真度最高的热稳定性聚合酶，保真性是Taq DNA聚合酶的50倍，Pfu DNA聚合酶的6倍。
5．Phusion DNA聚合酶扩增的PCR产物为钝端双链DNA，不能直接用于AT克隆。

产品组成：

成分	规格
Phusion DNA Polymerase，2U/μL	50μl
5×Phusion HF Buffer	2×1.5ml
5×Phusion GC Buffer	1.5ml
50mM MgCl2 Solution	1.5ml
5×PCR Enhancer	500μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：DNA 模板、引物、dNTP、超纯水等。

使用方法：(以50μL的PCR反应体系为例)

1．设置PCR反应,在一干净的PCR管中，依次加入下列成分：

5×Phusion HF Buffer	10μL
DNA 模板(自备)	＜250ng
dNTP(2mM each)(自备)	5μL
PCR引物(自备)	10pmol each
5×PCR Enhancer(选择添加)	1.5μL
Phusion DNA Polymerase	0.5μL
补超纯水到	50μL

注：
⑴ 如果反应体系不是50μL，各成分需按等比例增加或减少，也可根据PCR特点自行调节Phusion DNA Polymerase、模板和引物的用量，进行体系优化。
⑵ 对于扩增困难或序列较长的模板(如富含GC的或具有复制二级结构的)，可用5×Phusion GC Buffer 代替5×Phusion HF Buffer来进行PCR反应。
⑶ 请最后将Phusion DNA Polymerase 加入到反应体系内，防止该酶具有的外切酶活性降解引物。
⑷ 5×Phusion HF Buffer中已含有1.5mM MgCl2。如有需要，可根据PCR反应特点额外添加MgCl2。
⑸ 对于GC含量较高的模板，可选择性加入5×PCR Enhancer。

2．PCR反应参数：

过程	温度	时间
预变性	98℃	30s-3min
PCR反应(25-35个循环)	98℃	5-10s
	45-72℃	10-30s
	72℃	15-30s/kb
最后延伸	72℃	5-10min

3．反应结束后取5-10μL反应产物，琼脂糖凝胶电泳分析。


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·miRNA尿素-PAGE上样液
编号：BTN70608
英文名称：miRNAload
规格：1.5mL
本品是6×的miRNA尿素-PAGE变性电泳上样液，含有RNase-free的去离子甲酰胺、RNase-free的EDTA和RNase-free的染料等。

产品特点：
1. 即开即用，不需要制备RNase-free的各种溶液。
2. 使用简单，电泳时，先将miRNA样品与本上样液1：5混合，70℃加热处理2-3分钟后，0℃冷却即可直接上样。
3.染料分子小，不会干扰mi R N A的染色。
4.跟本公司的一站式miRNA 尿素-PAGE电泳套装兼容。
5.还可以用于miRNA的琼脂糖电泳。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

·非冻型血液RNA保存液
编号：BTN111202
英文名称：RNAhold Blood RNA non-freezing preservation solution
规格：100mL
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品。

产品特点：
1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。
2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。
3.适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。
4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。
5. 保存的样品可直接用本公司血液RNA提取试剂盒提取RNA。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：
注意：RNase污染无处不在，最好用本公司的高效无毒固相RNase清除剂处理RNA工作区域，千万不要使用烷基化试剂DEPC(相当于芥子*(代"气"))。

一:以白细胞为材料的保存方法(此法效果好于全血保存法)
1.室温1500-2000 g离心新鲜抗凝血液10-15分钟，最上层为血浆，最下层为红细胞，中间层为膜状的、含白细胞的Buffy Coat(含白细胞多的血液此层可能很厚)。
2. 吸出血浆后，小心将中间的白细胞层吸出(允许污染部分红细胞)到新的离心管中，加入5-10倍体积的本产品，混匀后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

二：以EDTA抗凝全血为材料的保存方法
3. 将血液取到EDTA抗凝管中后，迅速将0.5mL血液与1.5mL本产品混合，充分颠倒混匀，然后放常温(不超过30℃)保存不超过3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要现在4℃放置过夜，然后再离心去除保存液，最后再把细胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶会刺破白细胞，释放出其中的RNA，在后续实验去掉上清时会丢失)。

三：血液RNA的提取(本产品不含RNA提取试剂。此处以本公司的跟Trizol相当的动物RNA提取试剂盒操作步骤为参考。用户也可以使用其他RNA纯化试剂)
4. 提取RNA时，如果保存的白细胞在-20℃，则需要先室温化冻，如果保存在常温或4℃，则直接使用。
5. 取1.8mL混合液到新的2mL离心管中，5000g室温离心1分钟。
6.小心吸弃上清液(本产品)，细胞将形成沉淀(如果样品时全血，沉淀中将含有大量血液蛋白)。注意：上清一般会很浑浊，一定要尽可能弃尽。有时沉淀上面有白色晶体出现，属于正常现象。
7.在细胞沉淀中加入动物RNA提取试剂盒 1mL溶液A，剧烈震荡30秒(不能感觉到震荡即可，一定要看见管底液体旋转起来，否则只是液体表面的震动，下同)。震荡后颠倒几次看溶液是否均匀，如果有颗粒状物体说明还需要震荡裂解。
8.室温放置5分钟以使细胞充分裂解。
9. 将0.2mL自备的*仿加入到离心管中，剧烈震荡30秒。
10. 12000～15000g4℃离心3分钟。一般上清为无色的水相(含RNA，约0.5-0.9mL)；中间层为白色，含有DNA、蛋白质和其他细胞破碎物，不要触及；下层为有机相，一般呈深红色。注意：有时水相比重大于有机相，出现反相现象，此时应该取下面的水相。
11.小心将水相转移到另一自备的1.5mL塑料离心管中。如果水相超过0.75mL，则需要分成2管，否则在下步没法加入等体积的异丙醇。
12. 加入等体积的异丙醇到水相中，充分颠倒混匀。
13. 12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA。
14. 吸弃上清。注意：如果离心后出现两个相，则需要吸弃上面的一相，然后在下相(含RNA)中加入一倍体积的超纯水和一倍体积的异丙醇，混匀后12000～15000g4℃离心10分钟沉淀RNA，吸弃上清。
15. 将75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中，震荡几秒后12000～15000g4℃离心1分钟。
16. 弃上清
17. 12000～15000g4℃离心半分钟，用移液枪去除残留的液体。
18. 将20-50μL DEPC处理的水加入到沉淀中并吹打溶解，立即用于下述完整性、产率和纯度的检测，也可直接用于后续RT-PCR等试验或存放于-80℃待用。

四: RNA的检测(列出步骤仅供参考，本产品不提供相关产品)
19. RNA完整性的电泳检测：强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶中单链RNA分子会自生折叠成各种形状，尤其不能使用DNA上样液，因为没有经过去RNase处理。
20. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA用TE缓冲液(pH8.2)稀释10倍后检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。人血RNA产率一般为2-5μg/mL。
21. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。



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·SuperTOPO-Amp通用克隆试剂盒
编号：BTN160685-25A
英文名称：SuperTOPO Cloning Kit
规格：25次

·即用型LB平板培养基(含Tet)
编号：BTN130848D
英文名称：LB Petri Dish(Tet)
规格：10块
本产品为即用型LB平板培养基，A型为无抗生素LB平板，B型为LB-Amp平板，C型为LB-Kan平板，LB-Tet平板。

储存条件：低温运输及保存，有效期半年。

·杆菌肽溶液
编号：BTN120682
英文名称：Bacitracin Solution
规格：1mL
本产品是浓度为100mg/mL的杆菌肽溶液。杆菌肽(枯草菌肽； 雀西杆菌素；Ayfivin；Baciguent；Bacitin)，分子式C66H103N17O16S ，分子量是1422.69，CAS号是1405-87-4，易溶于水，能溶于乙醇、甲醇和冰乙酸。杆菌肽是由地衣型芽孢杆菌产生的多肽类抗生素，对大多数革兰氏阳性菌特别是耐药葡萄球菌具有较强的抗菌作用。

抗性机制：本品溶液能被多种重金属盐类沉淀，抗菌谱与青霉素相似，对革兰阳性细菌和阴性球菌、肺炎双球菌、葡萄球菌、淋球菌、脑膜炎双球菌及螺旋体等均有杀菌作用。其作用机制不仅作用于细胞壁，也影响原生质体，对胞浆膜也有损坏作用，影响其渗透性。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期6个月。

我公司正在打折促销克隆与表达全系列产品，恭候您的咨询选购SuperTOPO-Amp平末端克隆试剂盒品牌。