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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
低温运输
- 保质期:
长期
- 英文名:
Tth Endonuclease IV
- 库存:
545
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京现货Tth核酸内切酶IV折扣价,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京现货Tth核酸内切酶IV折扣价
编号:BTN131228
规格:500U
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
Tth核酸内切酶IV是一种热稳定的脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶。该酶切割AP位点5´端的第一个磷酸二酯键,产生3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。该酶也具有
3´二酯酶活性。Tth核酸内切酶IV主要用于碱洗脱和碱解旋等用途。
活性定义:1单位指在10μl缓冲液体系中,65℃条件下,1小时内能够切割1pmol含一个AP位点*的60bp寡核苷酸双链所需要的酶量。
AP位点的创建方法如下:37℃条件下,用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理10pmol含单一尿嘧啶碱基的60bp寡核苷酸双链2分钟。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
北京现货Tth核酸内切酶IV折扣价极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·菌体内毒素清除剂
编号:BTN90901
英文名称:Bacterial Endotoxin Scavenger
规格:200mL
内毒素是E.coli细胞壁的主要成分,传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来,然后再用各种方法去除其中的内毒素,操作繁琐,DNA 回收率低。本产品可以直接把E.coli 表面的内毒素去除,从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取,重组蛋白质提取)的污染。
产品特点:
1. 首个在菌体收集阶段去除内毒素的产品,从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触,从根本上防止了可能产生的污染。
2. 操作简单快速,用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素,只需要10分钟左右时间,不需要复杂仪器设备。
3.高效,能去除99%以上的内毒素。
4.跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容,DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA 丢失率可以高达50%)。
5. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒DNA可用于转染实验。
6. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内),也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
一:用于菌液小于3mL的样品
1. 收集1.5-3mL E.coli 饱和菌液,12000rpm离心1分钟,弃上清,得到细菌沉淀。
2. 加入1mL 本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟,弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次,得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。
二:用于菌液多于3mL的样品
整个操作同上,只是在15或50mL塑料离心管中进行,离心速度不能超过离心管的承受力,本产品的用量按比例增加。
疑难解答:
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同,所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附,离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子),能够形成大小不等的聚合物,跟质粒DNA和蛋白质大小接近,所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和*化铯超速离心)也不能将其有效分离。
北京现货Tth核酸内切酶IV折扣价关键词:BTN131228,Tth Endonuclease IV,Tth核酸内切酶IV
D-天冬*酸二甲酯盐*(代"酸")盐 Nitroso R salt 69630-50-8
十六烷基三甲基*化铵 4-Phenylbutyric acid 112-02-7
F030228 HRP标记兔抗猫IgG抗体 Rabbit Anti-Cat IgG*HRP
329-98-6 PMSF *甲基黄酰*
PY02-139 产毒培养基 250克
F050302 人IgG抗体 Human IgG
ARB12120 大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)Elisa方法检测 Rat soluble intercellular adhesion molecule 1,sicam-1 ELISA KIT
转铁蛋白 4-Ethylphenol 11096-37-0
BL0965 封闭绵羊血清正常(原液) 10ml
L-*丙*酸 MMC 63-91-2
PL0801 中量质粒提取试剂盒(溶液型,无内毒素,转染级)
87-79-6 L-山梨糖
ARB11194 人组织因子途径抑制物(TFPI)检测服务 Human tissue factor pathway inhibitor,tfpi ELISA KIT
F030840 BIOTIN标记兔抗驴IgG抗体 Polyclonal Rabbit Anti-Donkey IgG*BIOTIN
北京现货Tth核酸内切酶IV折扣价关键词:BTN131228,Tth Endonuclease IV,Tth核酸内切酶IV
·十二烷基磺酸*
编号:BTN131049
英文名称:SDS
规格:100g
本产品是促进溶解的理想去垢剂。在SDS(十二烷基)中碳链长度的独特分布利于在凝胶电泳实验中溶解病毒蛋白。可用于需要在SDS-PAGE后进行复性的实验(如果按照Blank,等的方法处理凝胶来去除C14和C16烷基磺酸盐)。

储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
·NTP溶液(10mM)
编号:BTN70906
英文名称:NTP Solution,10mM
规格:0.5mL
本产品是ATP、UTP、GTP、CTP四种核苷酸的混合液,每种核苷酸的浓度为10mM,纯度在98%以上(HPLC检测),不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染,可以直接用于体外RNA转录合成。使用浓度请参考相关手册。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期两年。
NTP的分子结构

·印迹膜抗体稀释液
编号:BTN81208
英文名称:Antibody Dilution Buffer
规格:250mL
本产品用于稀释Western Blot抗体,即开即用,方便快捷。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| 抗体稀释液成分一 | 100ml |
| 抗体稀释液成分二 | 0.5g |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
一、转膜(湿法电转移,本产品不含相关试剂)
1.制备湿法电转液:将湿法电转液干粉全部溶解在1L去离子水中得20×湿法电转液,用时用去离子水稀释20倍预冷待用。
2.根据PAGE胶的大小剪切同样大小的滤纸和各边都大1mm的硝酸纤维素膜(以下简称膜)。避免手直接接触膜。
3.将切好的膜浸泡在新鲜稀释的1×湿法电转液(下简称转移液)中15-20分钟。
注意:最好用镊子夹住膜的一边轻轻置于转移液上,只让膜下层不转移液接触,通过毛细管作用使整个膜浸湿。避免让膜沉入转移液中,否则膜不转移液之间形成的气泡会阻止膜的湿润。
4.在容器中将两块海绵垫、六层滤纸用转移液浸湿。
5.在转移夹上依次放上一张浸湿的海绵垫、三层浸湿的滤纸、一块PAGE胶(只要分离胶部分)、一张浸湿的膜、三层浸湿的滤纸、一张浸湿的海绵垫。
注意:每叠加层一定要用玻棒来回擀几遍以擀走里面的气泡。膜两边的滤纸绝对不能相互接触,否则电转移时会发生短路,烧坏装置。
6.合起转移夹幵放入转移槽中(一定要注意方向,转印带负电荷的蛋白质时电极方向是膜正胶负;转印带正电荷的蛋白质时,电极方向是膜负胶正),然后用预冷的转移液灌满转移槽。
7.插上电极,一般在冷却条件下用100V恒压转移30-60分钟或冷室中14V转移过夜。
注意:一定要检查电流的大小,电流一般在0.1-0.4A。应根据蛋白分子量的大小确定转膜时间,对于小分子量的蛋白,转膜时最好垫2张或更多张膜(最多可10 张),即使白质已经转过了第一张膜,还会在其它膜上检测到;对于大分子量的蛋白,转膜时电压要高一点,时间也要延长一点,开始最好也用两块或多张膜。转移时间长的时候特别要注意加强降温措施。如果目的蛋白转移效率低,可以在转移液中加终浓度为20%的甲醇或0.1%的SDS。
8.终止转移后,取出膜,幵在膜上剪去一个小角以标记方向。如有必要可用自备的各种染液对胶或膜进行染色以确定蛋白质转移效率。
二、封膜(本产品不含相关试剂)
1.将膜转移至杂交袋中,加5-10mL Western封膜液后热密封杂交袋开口。
2.室温下用脱色摇床摇动杂交袋30-60分钟。
三、与一抗二抗结合
1.用5mL Western抗体稀释液(配制方法:将抗体稀释液成分二干粉到入成分一溶液中,溶解后即可。未用完的抗体稀释液需-20℃保存)将自备的一抗稀释至适当的倍数(一般需要稀释10-100000倍使用,最佳稀释倍数跟一抗效价相关,需摸索)。
2.剪开杂交袋的一角,倒去封膜液,加入5mL新鲜稀释的一抗溶液,加热密封杂交袋开口。
3.室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟。
4.用抗体稀释液将自备的HRP或AP标记的二抗稀释至适当浓度(一般需要稀释500-4000倍。最佳稀释倍数跟二抗效价相关,需摸索)。
5.剪开杂交袋的一角,倒去一抗溶液(可留存),加入5mL新鲜稀释的二抗溶液,加热密封杂交袋开口。
6.室温下在脱色摇床上摇动杂交袋30-60分钟,也可过夜孵育。
7.剪开杂交袋的一角,倒去二抗溶液(可留存)。
8.剪开杂交袋,用镊子取出膜,用Western洗膜液在器皿中洗3次,每次10分钟。
9.根据二抗的标记酶选择下面两种显色方法之一。
四、HRP显色检测(对HRP标记的二抗,本产品A型,本产品不含相关试剂)
1.将膜平放,在吸附了抗原抗体的一面加入100-500μL TMB溶液A和100-500μL TMB溶液B,铺满整个膜表面(具体用量可按膜的大小增减)。
2.置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分钟,直至深蓝色条带出现。
3.用镊子夹起膜,放入去离子水中洗膜3次终止反应,每次30分钟。
4.空气中晾干后照相保存。
注意:膜显色后的颜色在数小时后将会褪色,不能永久存在,故需要及时照相。
五、AP显色检测(对AP标记的二抗,本产品B型,本产品不含相关试剂)
1.用新鲜配制的1×AP缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟。
2.将膜转移到新配制的BCIP-NBT法AP显色液中,每cm2膜需要0.1mL显色液。新鲜配制BCIP-NBT法AP显色液(以10mL为例)的方法:将9mL去离子水、1mL 10×AP缓冲液、50μl BCIP溶液和50μl NBT溶液混匀。此溶液必须在1小时内使用。
3.室温摇晃5-30分钟显色(37℃可加速反应)。
4.显色到合适程度后用自备去离子水洗膜3次终止反应,每次30分钟。
5.用吸水纸吸干膜上的水分,避光干燥保存或在一周内照相。
六、Western抗体清除剂(说明:此处理可能会使蛋白质失去某些表位,本产品不含相关试剂)
1.将膜浸泡在Western抗体清除剂中,70℃摇晃孵育30分钟,去除一抗和二抗。用Western洗膜液洗膜两次,每次10分钟。
2.膜即可用于下一次Western检测的膜封堵步骤。
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文献和实验酶切反应条件如下:在20 µl PCR产物混合体系中加入5U的内切酶,按相应的反应温度温育1小时。通常20 µl PCR产物体系中含有1 µg底物DNA,1单位的Vent DNA聚合酶,1× ThermoPol Buffer [10 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (PH 8.8@25°C),10 mM (NH4 )2 SO4 , 2 mM MgSO4和0.1% Triton X-100],以及终浓度为200 µM的dNTPs。表中标记有*的内切酶在酶切反应前
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