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        内切酶PCR反应中的活性

        互联网

        2846

         

        酶切反应条件如下:在20 µl PCR产物混合体系中加入5U的内切酶,按相应的反应温度温育1小时。通常20 µl PCR产物体系中含有1 µg底物DNA,1单位的Vent DNA聚合酶,1× ThermoPol Buffer [10 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (PH 8.8@25°C),10 mM (NH4 )2 SO4 , 2 mM MgSO4和0.1% Triton X-100],以及终浓度为200 µM的dNTPs。表中标记有的内切酶在酶切反应前需加入NaCl(终浓度为100 mM)或相应的10× NEBuffer(1×终浓度)。

        注意:在非最佳条件下进行酶切反应容易出现星号活性。要避免星号活性或希望取得更好的酶切效果,则需用乙醇沉淀纯化DNA,再将其溶解于相应的酶切缓冲液。此外,如果使用不纯的DNA聚合酶,会因其中混有其它核酸酶而影响整个反应结果。

        +++表示完全切割;++表示约50%被完全切割;+表示约25%被完全切割。

         

        在反应物中的活性
        Aat II  + + + 
        Acc I 
        Acc65 I  + + 
        Aci I  + + + 
        Acl I  + + 
        Afl II  + + + 
        Afl III  + + 
        Age I  + + + 
        Ahd I  + + 
        Alu I  + + + 
        Alw I  + + 
        AlwN I  + + 
        Apa I  + ++ 
        ApaL I  + + + 
        Apo I  + + 
        Asc I  + + + 
        Ase I 
        Ava I  + + + 
        Ava II  + + 
        Avr II  + + + 
        Bae I none
        BamH I  <center> + + +</center>
        Ban I  + + + 
        Ban II  + + + 
        Bbs I  + + + 
        Bbv I  + + 
        Bcg I  + + 
        BciV I + + 
        Bcl I  + + + 
        Bfa I  none
        Bgl I 
        Bgl II  + + + 
        Blp I  + + + 
        Bmr I <center> <font>+ + +</font></center>
        Bpm I  + + 
        Bsa I 
        BsaA I  + + + 
        BsaB I  + + 
        BsaH I  + + + 
        BsaJ I  + + + 
        BsaW I  + + 
        BseR I  + + + 
        Bsg I  + + 
        BsiE I  + + 
        BsiHKA I *  + + 
        BsiW I  + + 
        Bsl I + + 
        Bsm I  + + + 
        BsmB I  + + 
        BsmF I  + + 
        BsoB I  + + + 
        Bsp1286 I  + + + 
        BspD I  + + 
        BspE I *  + + + 
        BspH I  + + 
        BspM I  none
        Bsr I  + + + 
        BsrB I  + + + 
        BsrD I  + + 
        BsrF I  + + 
        BsrG I  + + 
        BssH II  + + 
        BssK I  + + 
        BssS I  + + + 
        BstB I  + + + 
        BstE I  + + + 
        BstN I  + + 
        BstU I  + + 
        BstX I  + + + 
        BstY I  + + 
        BstZ17 I  + + 
        Bsu36 I  + + + 
        Btg I <center> <font>+ + +</font></center>
        Bts I <center> <font>+ + +</font></center>
        Cac8 I  + + + 
        Cla I  + + 
        Dde I  + + + 
        Dpn I  (none, requires methylated substrate) 
        Dpn II  + + + 
        Dra I  + + 
        Dra III *  + + + 
        Drd I  + + 
        Eae I  + + + 
        Eag I 
        Ear I  + + + 
        EcoN I  + + 
        EcoO109 I  + + + 
        EcoR I  + + 
        EcoR V  + + + 
        Fnu4H I  + + + 
        Fok I  none
        Fse I  + + + 
        Fsp I  + + 
        Hae II  + + + 
        Hae III  + + + 
        Hga I  + + + 
        Hha I  + + 
        Hinc II  + + 
        Hind III  + + + 
        Hinf I  + + 
        HinP1 I  + + + 
        Hpa I  + + + 
        Hpa II  + + + 
        Hph I  + + + 
        Kas I  + + + 
        Kpn I  + + + 
        Mbo I  + + 
        Mbo II  + + + 
        Mfe I  + + 
        Mlu I  + + 
        Mly I <center> + + +</center>
        Mnl I  + + + 
        Msc I  + + 
        Mse I  + + 
        Msl I  + + + 
        Msp I  + + + 
        MspA1 I  + + + 
        Mwo I  + + 
        Nae I 
        Nar I  + + 
        Nci I  + + 
        Nco I  + + + 
        Nde I  + + 
        NgoM IV  + + 
        Nhe I  + + 
        Nla III  + + + 
        Nla IV  + + + 
        Not I  + + + 
        Nru I  + + 
        Nsi I  + + + 
        Nsp I <center> + + +</center>
        PaeR7 I  + + 
        PflF I  + + 
        PflM I  + + 
        Ple I  + + 
        Pme I  + + 
        Pml I  + + 
        PpuM I  + + 
        PshA I  + + 
        PspG I <center> + +</center>
        Pst I  + + + 
        Pvu I  + + 
        Pvu II  + + + 
        Rsa I  + + + 
        Rsr II  + + 
        Sac I  + + 
        Sac II  + + + 
        Sal I * 
        Sap I  + + 
        Sau3A I  + + + 
        Sau96 I  + + 
        Sca I  + + 
        ScrF I  + + + 
        SexA I <center> <font>none</font></center>
        SfaN I  + + 
        Sfc I  + + + 
        Sfi I  + + + 
        Sfo I <center> <font>+ + +</font></center>
        SgrA I <center> <font>+ + +</font></center>
        Sma I  + + 
        Sml I  + + + 
        SnaB I  + + 
        Spe I  + + + 
        Sph I  + + + 
        Ssp I  + + 
        Stu I  + + 
        Sty I  + + 
        Swa I <center> + + +</center>
        Taq I  + + 
        Tfi I  + + + 
        Tli I <center> + + +</center>
        Tse I  + + + 
        Tsp45 I  + + + 
        Tsp509 I  + + + 
        TspR I  + + 
        Tth111 I  + + 
        Xba I  + + + 
        Xcm I  + + + 
        Xho I  + + 
        Xma I  + + 
        Xmn I  + + + 

         

         

         

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