大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞大量库存促销

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百奥莱博专业生产销*(代"售")大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞大量库存促销，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞大量库存促销
产地：国产|进口
编号：BTN121004
英文名：E.coli Rosetta(DE3) Chemical Competent Cell
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达107。本感受态细胞适用于真核蛋白表达，具有*霉素抗性。

菌株基因型：F-ompT hsdSB(rB- mB-)gal dcm lacY1(DE3)pRARE(argU，argW,ileX，glyT，leuW，proL)(CmR)

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

大肠杆菌Rosetta(DE3)化学感受态细胞大量库存促销极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·甲基化专一性PCR试剂盒
编号：BTN100923
英文名称：Methylation Specific PCR Kit
规格：50次
本产品是基于PCR的甲基化DNA检测试剂盒(即MSP试剂盒)。它由两个成分组成，一个是亚硫*(代"酸")*盐试剂盒，用于将DNA中所有没有甲基化的C转化成U，而甲基化的C不变。二是优化的PCR试剂盒，利用客户自备的专一性引物，根据PCR来检测甲基化位点的位置。

产品特点：
1．本产品是亚硫*(代"酸")盐修饰试剂盒和即用型PCR 3.0的整合，即开即用，非常方便。
2．柱式DNA回收方法极大提高亚硫*(代"酸")盐修饰后DNA的回收率。
3．优化的PCR mix，含有PCR所需要的所有成分，减少了操作误差。
4．PCR结束后可以直接上样电泳，非常方便。
5．用户需要自备MSP专一性引物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B成分一(干粉)	2.3g×5瓶
溶液B成分二(干粉)	110mg×5瓶
通用溶胶液	50mL×2
离心吸附柱	50套×2
通用洗柱液	100mL
DNA洗脱液	10mL
PCR MagicMix 3.0	1.5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(PCR MagicMix 3.0要低温运输，-20℃保存)，有效期一年。

自备试剂：超纯水、MSP引物、对照DNA模板和引物。
 注：严格的实验一般要求下列5种对照DNA模板和相应的引物对，用户可以根据自身实验的要求只做其中的部分。

对照名称	起始DNA	处理
未修饰未甲基化DNA对照	未甲基化DNA (无甲基化宿主菌或体外扩增而得)	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
已修饰未甲基化DNA对照	未甲基化DNA(同上)	经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
未修饰甲基化DNA对照	甲基化DNA (用甲基化酶修饰未甲基化DNA而得)	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
已修饰甲基化DNA对照	甲基化DNA(同上)	经过亚硫*(代"酸")*盐修饰
未修饰样品DNA对照	样品DNA	未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰

使用方法：

Ⅰ．亚硫*(代"酸")*盐修饰
一、准备试剂
1．配制溶液B成分一溶液：加5.0mL超纯水和27μl溶液A到装有溶液B成分一干粉的棕色塑料瓶中，轻柔摇晃至溶(尽量少的剧烈摇晃，约需要5分钟)，总体积约5.5mL。
2．配制溶液B成分二溶液：加10mL超纯水到装有溶液B成分二干粉的棕色塑料瓶中，轻柔摇晃混匀(尽量少的剧烈摇晃)。
3．配制溶液B工作液：将55μL溶液B成分二溶液加入到溶液B成分一溶液中，轻柔颠倒混匀即可使用。一瓶溶液B工作液可以用10次。
二、DNA变性处理
1．将5μL溶液A加入到45μL DNA溶液中并吹打混匀(总体积没有45μL需要用水补足到45μL，DNA总量在0.2-5μg之间，不能超过 5μg，一般使用2μg DNA即可)。 注意：DNA必须是线状的，长度最好在20-50 Kb左右。基因组DNA可以预先用酶切处理(酶的位点不得在研究的DNA序列之内)，也可以用机械打断法处理(得到的DNA一般在20-50 Kb左右)。
2．37℃放置15分钟使DNA充分变性。
3．立即在DNA溶液中加入500μl溶液B工作液，轻柔颠倒混匀。
4．55℃避光保温8-16小时。如果使用水浴或没有热盖的PCR仪器保温，最好加50-100μL石蜡油，避免水分蒸发。
 注意：必须避光保温。55℃处理8小时足以使95%的C变成U，保温时间过长会引起DNA的断裂。如果有的区域的C难以转化成U，可以改用两步式PCR处理(每55℃保温3小时后95℃变性处理5分钟，共5-10个循环)，效果会更佳。
5．冰浴10分钟。
6．加入1mL的通用溶胶液，颠倒混匀后取一半溶液上柱。单链DNA会结合在离心吸附柱上，亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
7．12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8．取另一半溶液再上柱，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上，亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
9．加入0.7mL通用洗柱液，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以洗涤残留的亚硫*(代"酸")*盐。
10．干甩半分钟后，将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入50μl新鲜配制的溶液A稀释液(5μl的溶液A原液与45μl的超纯水混合而得)，室温放置2分钟后离心半分钟。
11．将洗脱下来的DNA溶液放置在37℃保温15分钟。
12．加入0.7mL的通用溶胶液，混匀后上柱。
13．12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上，杂质等将穿透过柱。
14．干甩半分钟后，将离心吸附柱转移到一个新的离心管中，加入50μl DNA洗脱液，室温放置2分钟后离心半分钟。
15．所得溶液即为亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA，可以用于下面的甲基化专一PCR。
 说明：此方法的回收率一般为50%，2μg DNA最后可以得到1μg的修饰后的DNA。由于修饰后的DNA呈长短不一的单链，EB染色效果很差，所以不能用灵敏度低的琼脂糖电泳-EB染色的方法检测，但可以用灵敏度更高的PAGE-银染方法检测。

Ⅱ．甲基化专一性PCR(以60μL的标准PCR反应体系为例)
1．在一干净的PCR管中，加入下列成分(冰上操作)：

成分	样品管	对照管
PCR MagicMix 3.0	30μl	30μl
亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA模板	100-500ng	无
对照DNA模板	无	100-500ng
自备MSP引物F	25pmol	无
自备MSP引物R	25pmol	无
对照模板专一性PCR引物F	无	25pmol
对照模板专一性PCR引物R	无	25pmol
补水到	60μl	60μl

 注：有5种对照DNA模板可以供用户根据自身需要选择，详见自备试剂栏。
2．将混合物混匀，放入PCR仪中进行热启动PCR，结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。


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·dNTP溶液(2.5mM)
编号：BTN51208A
英文名称：dNTP Solution，2.5mM
规格：0.5mL
本产品是dATP、dTTP、dGTP、dCTP四种核苷酸的混合液，每种核苷酸的浓度为2.5mM，纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于PCR、RT-PCR、cDNA合成、DNA测序、DNA探针标记等反应。使用浓度根据具体的反应决定，请参考相关手册。



储存条件：低温运输和-20℃保存、有效期一年。

DNA为何使用2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶？
 DNA为何不选择现成的光合作用产物核糖和合成RNA的原料尿嘧啶(uracil)分别作为其糖分子和碱基，而去选择需要额外的合成步骤才能得到的2"-脱氧核糖和胸腺嘧啶(thymine)，其原因何在呢？目前的主流观点是：DNA不能选择核糖的原因之一是由于核糖2"位置上的OH基团会使得到的双螺旋骨架结构不均匀、不平行，难以有效地折叠进染色体结构中，而使用2"-脱氧核糖则能得到均匀平行的双螺旋结构；原因之二是核糖2"位置上的OH基团会对邻近的磷酸二酯键进行分子内亲核攻击，降低分子的稳定性，而对遗传物质来说稳定性十分重要，所以DNA选择了失去分子内亲核攻击能力的2"-脱氧核糖。对信使分子而言，稳定性并不重要，所以RNA仍然使用核糖。
 DNA使用胸腺嘧啶的原因是DNA中的胞嘧啶(cytosine)会缓慢水解变成尿嘧啶，如果尿嘧啶也是DNA的正常组成成份，则DNA修复系统就不能区分哪些尿嘧啶是正常的，哪些是需要修复的。使用胸腺嘧啶(比尿嘧啶分子多一个甲基)不但能保持跟尿嘧啶一样的形成碱基对的能力，同时又能跟尿嘧啶区别开来，使DNA分子中出现的任何尿嘧啶都能被尿嘧啶DNA糖苷酶(uracil-DNA glycosylase)发现和修复。



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SJ0409 MUG4 甲基伞形酮葡萄糖苷酸
马来酰肼*盐 Nickel oxalate dihydrate 689-82-7
ARB11178 人波形蛋白(VIM)含量分析 Human vimentin,vim ELISA KIT
CYB168011 猪血清 500ml/瓶
5′-核苷酸酶 Spermine 9027-73-0
DN1101 细菌基因组DNA快速提取试剂盒
HC0153 多用冰盒
亚麻酸 Flavourzyme 463-40-1
ARB13199 小鼠脂蛋白脂酶(LPL)Elisa方法检测 Mouse lipoprotein lipase,lpl ELISA KIT
ARB11156 人周期素依赖性激酶2(CDK-2)代做ELISA实验 Human cyclin-dependent kinase 2,cdk-2 ELISA KIT
PY02-430  TAT肉汤基础  250克  
F020211 兔抗狗IgG抗体 Rabbit Anti-Dog IgG
137-16-6 Sodlum Lauroylsarcosine 十二烷基肌*酸*
PY02-402  CATA琼脂  100克  
F030306 胶体金标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*GOLD
羧苄青霉素* FMN-Na 4800-94-6
ARB14159 植物多酚氧化酶(PPO)elisa测定使用说明书 
DL-天冬*酸 L-tert-Leucine 617-45-8
ARB12205 大鼠孕激素/孕酮(PROG)elisa检测 Rat progesterone,prog ELISA KIT
PY02-135  菌种保存培养基  250克  
ARB13636 兔子脂联素(ADP)检测服务 Rabbit adiponectin,adp ELISA KIT
BL0632 Q-琼脂糖凝胶HP Q Sepharose HP

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