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- 详细信息
- 技术资料
- 库存:
709
- 英文名:
E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
干冰运输、-80℃保存
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞厂家价格是高品质的克隆与表达产品,由北京百奥莱博供应,用于生化科研试验,本产品质量好,且极具价格优势,深为用户称道,了解更多大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。
名称:大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞厂家价格
英文名:E.coli BL21 (DE3) Chemical Competent Cell
编号:BTN90505
规格:0.1mL*10
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。使用pUC19质粒检测本产品,转化效率可达107。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。
该感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3 区的lacUV5启动子,该区域整合于BL21的染色体上。
菌株基因型为:F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm(DE3)
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
更多有关大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞厂家价格的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
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·碘化丙啶(PI)干粉
编号:BTN130863
英文名称:Propidiumodide,Powder
规格:10mg
PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

CAS号:25535-16-4
分子式:C27H34I2N4
分子量:668.39
储存条件:低温运输,-20℃干燥避光保存,有效期一年。
·大肠杆菌DH10B电击感受态细胞
编号:BTN160901
英文名称:E.coli DH10B Electroporation-Competent Cell
规格:50μL×5
本电击感受态细胞只能用于电击转化,不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株,mcrA、mcrBC 及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(无论真核生物还是原核生物的基因组DNA 都能被高效的转入DH10B中)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZΔM15 标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选,rpsL 赋予其链霉素抗性。DH10B电击感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。本感受态细胞经特殊工艺制作,经 pUC19质粒检测,转化效率>1010cfu/μg。
菌株基因型为:[F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG。
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC培养基等。
使用方法:
1. 将0.1 cm的电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的DH10B电击感受态细胞插入冰中5分钟,待其融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP 管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。(注:对于质粒,测定转化效率使用1μl 10 pg/μL的对照质粒pUC19;对于连接产物,请用乙醇沉淀DNA后加入适量TE缓冲液(10mM Tris HCl,pH7.5; 1mM EDTA)重悬,DNA浓度不超过100 ng/μL,体积不超过5μL/50μL感受态。)
3. 用 200μl 枪头(用刀切除0.5 cm 枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。
4.启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=2.4 kV(此为BioRad电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。
5. 向电击杯中加入700μL 不含抗生素的无菌培养基 SOC.,混匀后转移到空EP 管中,37℃,200rpm 复苏60分钟。
6. 5000rpm离心一分钟收菌,重悬后取100-200μL 涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。平板上(因菌量较大,若全部涂板请选用直径15cm培养皿2-5个)。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放 37℃培养至少13小时。
注意事项:
1. 加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。
2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡,气泡会增加弧光放电风险。
3. 当 DNA 不纯或存在盐,乙醇,蛋白及缓冲液等污染时,转化效率急剧下降。
4.电击杯里的离子可增加溶液的电导,增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。
5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率,推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。
6. 对于连接产物转化,最好转化前乙醇沉淀DNA后用适量TE缓冲液(10mM Tris HCl,pH7.5; 1mM EDTA)重悬产物,保证DNA浓度不超过100 ng/μL。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率,增加弧光放电的风险。
7. 混入质粒时应轻柔操作,吸取感受态细胞时避免用力过猛,以免剪切力过大损伤细胞膜,降低转化效率。
8.转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
9.电击感受态细胞最好保存在-80℃以下,高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。
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