北京现货农杆菌GV3101化学感受态细胞优惠

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应北京现货农杆菌GV3101化学感受态细胞优惠，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京现货农杆菌GV3101化学感受态细胞优惠
规格：10×100μL
产地：国产|进口
编号：BTN140384
 本产品为GV3101农杆菌化学感受态细胞，其具有利福平和庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作，经pCAMBIA2301质粒检测转化效率高达104cfu/μg。

基因型：C58(rifR)Ti pMP90(pTiC58DT-DNA)(gentR/strepR)Nopaline。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在 28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化。
2. 无菌条件下，向刚刚融化的感受态细胞悬液中加入需要转化的质粒，每100μL感受态细胞加1μg质粒DNA，轻柔混匀。冰水浴中静置10分钟。
3. 将离心管置于液氮中速冻 5分钟(注：也可以用干冰和无水乙醇混合物替代液氮)。
4. 迅速将离心管置于37℃水浴静置中5分钟，不要晃动水面。然后快速转至冰水浴中静置5分钟。
5. 加入800μl 无抗生素的2×YT或LB液体培养基，28-30℃振荡培养2~3小时。使菌体复苏，表达抗性。
6. 5000rpm离心1分钟收菌，保留100μl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，均匀涂布到含有相应抗生素的LB 固体培养基平板上，待平板中的液体完全吸收后，倒置平板，28-30℃培养48-72小时。
 注：当平板只含有50μg/mL kan时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入50μg/mL kan，20μg/mL rif时，需 28℃培养 60h；如果使用的平板含有50μg/mL rif 则需要 28℃培养 72-90小时。

注意事项：
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10 ；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 利福平浓度不应高于25μg/μL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有 50μg/mL kan，若所用平板含有 20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止 Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。
6.相关抗生素配方：

 

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素(carb)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
硫*(代"酸")卡那霉素(kan)	双蒸水溶解	50mg/mL	50μg/mL
链霉素(strep)	双蒸水溶解	10mg/mL	50μg/mL
利福平(rif)	DMSO溶解	10mg/mL	20μg/mL
庆大霉素(gent)	双蒸水溶解	20mg/mL	40μg/mL

北京现货农杆菌GV3101化学感受态细胞优惠极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·ATP依赖的DNase
编号：BTN120510
英文名称：ATP Dependent Dnase
规格：200U
在含有ATP的Buffer反应体系中，本产品能够特异性地水解线性双链DNA产生脱氧核糖核酸，但对环状双链DNA不起作用。本产品可用于除去质粒或粘粒等环状DNA样品中残留的少量线性基因组DNA片段的污染，减少对后续实验的影响。在基因工程实验中，制备的质粒和粘粒，即使是通过*化铯/*乙锭梯度离心方法或其它严格的方法制备，也常含有碱裂解操作过程中带来的少量细菌基因组DNA片段的污染，尤其在制备低拷贝克隆载体的质粒或粘粒等时，这种现象更为明显，使用本产品即可以有效的去除这些污染。

产品特点：
1．使用本制品可以有效除去样品中的基因组DNA，然后通过70℃、5 min的加热处理即可使酶完全失活，从而减少基因组污染物对质粒或粘粒等的常规分析、亚克隆和序列测定等后续实验结果的影响。
2．此产品可用于低拷贝的质粒或粘粒的提取及除去质粒等环状DNA中线性基因组DNA污染物。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：以线性化的pMD18 DNA为底物，在1mM ATP存在、pH9.4缓冲液中，37℃反应30分钟，催化生成1nmol脱氧核苷酸所需要的酶量，定义为1活性单位。在10μL反应体系中，加入本产品0.2 U，10×ATP依赖的DNA酶Buffer 1μL，0.2μg的线性化的pMD18 DNA，在37℃条件下反应30分钟，能够使线性化的pMD18 DNA产生95%以上的降解作用。

使用方法：
使用本产品除去 pUC18质粒中含有的大肠杆菌基因组DNA片段污染物(占60%)，可以提高阳性克隆的比率。

1．在微量离心管中配制下列反应液：

成分	样品	对照
10×反应Buffer	1μL	1μL
pUC18质粒DNA混合物	1μg	1μg
ATP依赖的DNA酶	2U	-
dH2O	Up to 10μL	Up to 10μL

2．37℃反应2小时。长时间反应效率有下降的倾向，建议反应时间1～2小时。
3．70℃加热5分钟，使ATP依赖的DNA酶失活。
4．在微量离心管中制备下列酶切反应液：

成分	用量
10×H Buffer(客户自备)	1μL
第3步反应液	5μL
EcoR I(客户自备)	30U
dH2O	Up to 10μL

5．37℃反应1小时之后，进行60℃ 15 min反应，使EcoR I失活。
6．在微量离心管中制备下列连接反应液：

成分	用量
10×T4 DNA Ligase Buffer(客户自备)	1μL
第5步酶切反应液	2μL
T4 DNA Ligase(客户自备)	350 U
dH2O	Up to 10μL

7．16℃反应1小时。

取上述连接反应液2～10μL，转化到JM109感受态细胞中，涂平板培养，进行蓝白菌落筛选并计数。实验结果表明，使用ATP依赖的DNA酶处理的pUC18质粒DNA混合物(含60％大肠杆菌基因组DNA片段)的自连结果中，白色菌落减少80%以上，有效抑制了大肠杆菌基因组DNA的污染。



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