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- HCCL-004
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海研谨生物
- 细胞类型：
内皮细胞
货号：HCCL-004
细胞介绍
该细胞来源于人静脉内皮，可在半固体培养基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。
细胞特性
- 来源：人静脉内皮
- 形态：内皮细胞
- 含量：>1x106 个/mL
- 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
- 规格：T75瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
- 准备F-12K培养基(F-12K:SIGMA,货号N3520, 添加0.1 mg/ml 肝素; 0.03-0.05 mg/ml 内皮细胞生长因子)，90%；优质胎牛血清，10%。
- 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
- 冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
- 细胞处理：
- 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
- 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
- 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
- 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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文献和实验正常人脐静脉原代内皮细胞培养一、实验试剂1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplem e nt2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ） + 1% P/S4、染色液： 0.4% Trypan Blue5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit6、检测试剂：抗人
麻醉家兔、大鼠体表心电图（electrocardiogram，EC
实验心电图只连接四肢电极，分别是：右上肢红色，左上肢黄色，左下肢绿色，右下肢黑色，记录标准肢体导联Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和加压肢体导联aVL、aVR、aVF六个心电图形。标准Ⅱ导联心电图只记录导联Ⅱ的图形。 1. 实验动物与器材 家兔，体重为2kg左右；大鼠，体重为200～250g左右。20%氨基甲酸乙酯注射液或者1.5%戊巴比妥钠注射液，心电图仪或者多通道生理信号采集记录仪器。 2. 实验方法与步骤 取家兔一只，称体重，采用经耳缘静脉注射20%氨基甲酸乙酯注射液5ml/kg
）并放到5 ml 消化液中37度消化。用手不断晃动混合物，每五分钟换一次消化混合物。为了这样做，离下碎片，去除上清，用5 ml 预热的消化溶液代替培养基并继续混合。 （5）加入1/10体积的血清到消化溶液中。这将失活酶并让细胞附着。将细胞放到组织培养塑料上1小时。这个预铺让成纤维细胞附着而不是内皮细胞（EC）。（6）去除未附着的细胞，离心200×g 5 min，然后直接进入富集步骤。2. 富集内皮细胞 用抗体包被免疫磁珠分离内皮细胞：加入25 ul 免疫磁珠（1x107）到一个1.5 ml
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