M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶) 工具

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北京百奥莱博专业生产供应M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶) 工具酶，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶) 工具酶
规格：2000U|10KU|50KU
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：YT394
本品是一种经过改造和优化的M-MLV反转录酶，具有正常的依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能够以RNA或DNA为模板，在引物存在的情况下进行互补DNA链的合成，即可以进行cDNA(complementary DNA)的第一链合成。

本产品是最常用的反转录酶之一，广泛用于获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成，后续可以用于PCR、real-time PCR也称定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二链合成以及cDNA文库的构建等。本品还可以通过反转录用于DNA探针的荧光、生物素、地高*(代"辛")或同位素标记等，也可以通过引物延伸(primer extention)来分析和研究RNA。

本产品无RNase H活性，反转录效率高、产物长度长。本产品与野生型M-MLV反转录酶相比，无RNase H活性，不能选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，从而有助于高效合成长度更长的cDNA。本产品经测试可以轻松完成长度为8 kb及以下基因的反转录(参考图1)，反转录的最大长度可以超过10kb。


使用本品反转录总RNA后，对于不同长度的cDNA进行PCR扩增后的电泳效果图。图中可见对于0.2-8kb的cDNA可以非常高效地被反转录。

本产品热稳定性高。最适反应温度为42-45℃，但当温度达到50℃时仍具有很高活性，且可获得较高产量的cDNA。


在不同温度下的反转录效果。用从NIH3T3细胞抽提获得的总RNA 500 ng，在20μl的反转录体系中按照图中所示温度进行反转录。反转录完成后取1μl反转录产品进行目的基因的PCR扩增和电泳。

本品是一种大肠杆菌重组高表达的的反转录酶，由于其表达量非常高，大大提高了本产品的性价比。本反转录酶含有从Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的缺失RNase H domain的pol基因，并进行了突变优化以提高其热稳定性、反转录效率和表达量。

酶活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)·oligo(dT) 12-18 as template-primer。反应体系为 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.5mM [3H]-dTTP and 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

酶储存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01% NP-40 and 50% glycerol。

失活或抑制：80℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚*(polyamine)对M-MLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。

本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

储存条件：-20℃。

更多有关M-MLV反转录酶II(RNase H-)(逆转录酶) 工具酶的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·M-MuLV反转录酶(逆转录酶)
编号：YT392
英文名称：M-MuLV Reverse Transcriptase
规格：2000U
本品是一种经过改造和优化的M-MuLV反转录酶(RNase H-)。和普通的M-MuLV反转录酶相比，M-MuLV反转录酶(RNase H-)也是一种依赖于RNA或DNA模板的DNA聚合酶，可以以RNA或DNA为模板在引物存在的情况下完成互补DNA链的合成；但缺失了Ribonuclease H(RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA。M-MuLV反转录酶(RNase H-)是最常用的反转录酶之一。

特点：M-MuLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达13kb的cDNA，而普通的M-MuLV反转录酶(RNase H-)仅能合成长达9kb的cDNA；M-MuLV反转录酶(RNase H-)的最适反应温度为42-45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MuLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。

用途：M-MuLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。M-MuLV反转录酶(RNase H-)也可以用于DNA探针的标记，通过引物延伸(primer extention)来分析RNA，以及用于基因芯片荧光探针的标记。

来源：本M-MuLV反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达，表达的基因为经过突变优化的编码Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase的pol基因片段。

活性定义：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at 37℃. Enzyme activity is assayed in 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 6 mM MgCl2, 10 mM DTT, 40 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP, 0.4 mM polyA·oligo(dT)12-18。

纯度：不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

酶储存溶液：50 mM Tris, pH 8.3, 100mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。

Reaction Buffer(5X)：250 mM Tris, pH 8.3 at 25℃, 250 mM KCl, 20 mM MgCl2, 50 mM DTT。

失活或抑制：70℃孵育10分钟可以导致M-MuLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚*(polyamine)对M-MuLV反转录酶(RNase H-)有抑制作用。

本产品中M-MuLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200U/μl，用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

储存条件：-20℃。


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·OCT-1凝胶迁移突变探针(10μM)
编号：YT237
英文名称：OCT-1 Mutation Probe For EMSA(10μM)
规格：30μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的OCT-1 consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－OCT-1的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行90-180个突变探针的冷竞争反应。如果用于生物素标记探针的冷竞争时，可以进行约30个冷竞争反应。

OCT-1 consensus oligo的序列如下：
5"-TGT CGA ATG CAA ATC ACT AGA A-3"
3"-ACA GCT TAC GTT TAG TGA TCT T-5"

EMSA突变探针－OCT-1中OCT-1的公认的结合位点发生了突变，从而使OCT-1无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和OCT-1的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和OCT-1的结合的条带不会被抑制。参考下图。


一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·FoxO3a抗体
编号：YT776
英文名称：anti-FoxO3a antibody
规格：>20次
本抗体是用人FoxO3a Glu50附近一段多肽作为抗原制备而成的抗FoxO3a兔单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测，至少可以检测20次。

本FoxO3a抗体识别的是总FoxO3a(total FoxO3a)，可以检测内源性的FoxO3a蛋白水平，未发现和外源表达的FoxO4或FoxO1有交叉反应。

转录因子Forkhead家族蛋白与横纹肌肉瘤、急性白血病等肿瘤发生有关。该转录因子蛋白家族中的FoxO1,FoxO4和
FoxO3a，和线虫同源蛋白DAF-16的序列高度相似，介导了包括IGFR1,PI3K和Akt在内的信号转导通路。Forkhead家族蛋白激活后，可通过促进细胞周期阻滞(cell cycle arrest)和细胞凋亡而抑制肿瘤。高表达Forkhead家族蛋白会导致细胞周期抑制蛋白p27Kip1的激活。同时Forkhead家族蛋白在TGF-β介导的p21CIP1上调中起作用，而该过程又可被PI3K所负调控。胰岛素等诱导的增殖信号会导致FoxO蛋白通过Akt介导的Thr24、Ser256和Ser319位点的磷酸化，导致FoxO从细胞核中转运到细胞浆中，从而抑制其转录活性。FoxO还可以被Sirt1、p300等进行乙酰化调控。

FoxO3a，也称FoxO3或FKHR-L1，属于Forkhead蛋白家族中的O亚家族(O subclass)，是一种可以被Akt磷酸化后转运到细胞浆中而失活的转录因子。FoxO3a可识别和结合DNA序列5"-[AG]TAAA[TC]A-3"。FoxO3a可以通过上调促凋亡基因Bim和PUMA或下调抗凋亡基因FLIP等，触发细胞凋亡。FoxO3a也可以上调抗氧化酶如过氧化*酶和MnSOD，从而抵抗氧化应激反应。FoxO3a被认为是抑瘤基因，和多种肿瘤有关。FoxO3a基因型与人类长寿密切相关。

产品组份：
FoxO3a抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml

抗体参数：

免疫原物种：人
免疫原：人FoxO3a Glu50附近一段多肽
克隆性：单克隆抗体
宿主：兔
用途：WB,IF
交叉反应性：人，小鼠，大鼠
同种型：IgG
FoxO3a分子量：82～97kD
推荐稀释比例：WB(1:1000),IF(1:200)

注意事项：
1. 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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