动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

    试剂盒适用于哺乳动物组织和细胞的DNA提取

    本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取组织和细胞的基因组DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

操作过程如下：

1.样品的处理：

(1)细胞：取1×106-1×107个悬浮培养细胞，12000rpm离心1min收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再用预冷的PBS吹打成细胞悬液，然后12000rpm离心1min收集细胞，尽量除去上清，加200μL溶液A，振荡至彻底混匀。

(2)组织：组织量不宜过大，一般不要超过25mg，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的PBS或无菌水充分悬浮，然后12000rpm离心1min收集细胞，尽量除去上清，加200μL溶液A，振荡至彻底混匀。

2.向悬浮液中加入2μL RNase A，55℃放置5min。

3.加入20μL的蛋白酶K，充分颠倒混匀，56℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要1-3个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。

4.加入200μL体积溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可在75℃放置15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。

5.加入200μL无水乙醇，充分振荡混匀15s，溶液变清亮。此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，将溶液和絮状物都加入吸附柱中。

6.12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7.向吸附柱中加入600μL漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8.重复步骤7。

9.12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10.将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心2min。

11.可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。

使用Solarbio-D1700与A Company分别提取100mg小鼠肝脏DNA，进行核酸电泳胶图对比结果。

使用Solarbio-D1700与A Company分别提取100mg小鼠肝脏DNA，浓度及比值结果。

使用Solarbio-D1700与A Company分别提取Hela、3T3细胞DNA，进行核酸电泳胶图对比结果。