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- 2025年07月13日
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实时荧光定量PCR
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北京晶典生物科技有限公司
简介
实时荧光定量PCR（qPCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个PCR 进程，通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据，可用于检测基因组拷贝数变异。
实时荧光定量PCR技术原理
qPCR分为两种，包括TaqMan荧光探针和SYBR Green荧光染料。
使用SYBR荧光染料法来进行荧光定量PCR时，首先在PCR反应体系中加入过量SYBR荧光染料。SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后发射一定量的荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
Taqman探针则是利用探针与模板的特异性结合的特点，以及探针内荧光报告基团和淬灭基团的分子特性来实现对PCR进行定量检测。这种方法可以实现高灵敏度，严格针对特定碱基序列的定量实验。
实时荧光定量PCR技术特点
（1）封闭反应，无需PCR后处理；
（2）特异性强，灵敏度高；
（3）采用对数期分析，摒弃终点数据，定量准确；
（4）定量范围宽，可达到10个数量级；
（5）仪器在线式实时检测，结果直观，避免人为判断；
（6）可实现一管双检或多检；
（7）操作安全，缩短时间，提高效率。
实时荧光定量PCR服务内容
北京晶典生物科技有限公司竭诚为您提供完整的自定义基因组区域拷贝数变异（CNV）实时荧光定量PCR检测服务。
实时荧光定量PCR样本要求
（1）提供新鲜组织/细胞材料或者直接提供已纯化的DNA，确保总量>5μg/样品；
（2）提供已知的全场基因序列或者待检测CNV的基因组区域；
（3）客户可提供引物，没有引物的情况下，本公司可帮助设计合成。
实时荧光定量PCR结果提交
（1）实验详细步骤和相关数据；
（2）标准曲线、扩增曲线或者溶解曲线等；
（3）完整的实验报告；
（4）生物信息分析报告（如客户需要）
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文献和实验实时荧光定量PCR系统新应用：基于定量PCR的mic roRNA整体分析
中文版： LightCycler®480 实时荧光定量PCR系统新应用：基于定量PCR的mic roRNA整体分析.pdf 英文版： New Application for qPCR-based microRNA Profiling.pdf
实时定量PCR也被称为实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR)，是一种在DNA扩增反应中加入荧光基团，以荧光信号积累实时监测每次PCR循环后产物总量，进而对待测样品中的目的序列进行定量分析的方法。 基本原理 在学习实时定量PCR数据处理之前，我们首先需要了解一下它的数学原理，Ct值为什么是我们数据处理过程中的一个关键的因素。这两个图显示的是实时定量PCR的一组结果。上图是原始的线性图谱，下图则是处理过的指数图谱，但是它们两者表示的是同样
的治疗效果。 研究团队在建立的皮下胰腺癌肿瘤小鼠模型、原位胰腺癌肿瘤小鼠模型和患者来源的异种移植瘤小鼠中进行实验，可以发现共表达CXCR-6的T细胞相比较而言会表现出增强的瘤内积累，具有更持久的抗肿瘤活性，进而延长动物的生存时间。最后研究团队提出：通过在特异性CAR T细胞上共表达肿瘤特异性的趋化因子受体，是增强获得性免疫疗法治疗实体瘤的一种新策略。 研究团队为了确定胰腺癌小鼠模型中合适的趋化因子靶点，使用QPCR的方法定量不同趋化因子的RNA水平。实时荧光定量PCR（Quantitative Real
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