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深圳托普生物
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实时荧光定量核酸扩增检测
QPCR的英文名称为Real-time Quantitative PCR Detecting System,即实时荧光定量核酸扩增检测系统,实时荧光QPCR是当今世界用于临床的先进核酸分子诊断技术,被美国FDA承认并推崇的一项检测技术。
拓普生物公司QPCR平台是以GMP标准建立的,每一步实验有独立的操作区,分别为试剂准备区,标本制备区和扩增&产物分析区,各区域的样本传递通过区内的传递窗进行传递,人员测需要跟换对应区域的隔离服和鞋才可以进入,这样严格的操作为了减少污染打下了良好的基础。
从项目开展之日起,QPCR平台技术人员即对相应的目的基因进行引物设计,通常选区基因的保守区进行设计,而且需要跨越2个外显子,产物长度控制在50-200bp;选出多对引物之后,再用软件进行对比分析(通常为primer5或者Oligo7等等),将有发夹结构、错配和二聚体现象等剔除,最后选出1-2对较优的引物进行送合成。
引物合成回来后,我们需对引物进行预实验验证,选取与项目同源的样本进行,进行多次上机确认之后,再用可行的引物进行QPCR实验。
拓普生物QPCR平台图片展示

拓普生物QPCR实验流程

实验结果展示

QPCR数据统计分析结果图
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文献和实验Real-time qPCR 手册——手把手教你从菜鸟到高手
的LineGene 系列。 随国内生命科学的快速发展,科研水平不断提高,发高水平文章已不再是新鲜事。与其同时,国内公司经过长期不懈的努力,也有自主研发的 real-time PCR 仪器生产比如西安天隆科技公司的 TL 系列仪器。 二、Real-time qPCR 概述 1. Real-time qPCR 原理 实时 PCR 就是在 PCR 扩增过程中,通过荧光信号,对 PCR 进程进行实时检测。一般来讲,定量 PCR 仪包括:实时荧光定量 PCR 仪主要由样品载台、基因扩增热循环组件、微量荧光检测
真香!用 qPCR 做外泌体研究,南京医科大学拿下 41 分 SCI
方法 1. 外泌体 RNA 如何提取? 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取,也可以用 Trizol 法提取,建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1(也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀)。 2. 外泌体 RNA 如何定量? 外泌体 RNA 含量很低,不建议使用微量紫外分光光度计定量,可以使用 Agilent 2100 生物分析仪等定量,也可以直接按最大体积进行逆转录实验。 3. 外泌体做 qPCR 检测应该选什么参照? 外泌体没有通用的内参选择,可以使用外参(cel
问:什么是QPCR?答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系?答:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获93年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势,因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快,成为分子生物学诊断的主流
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