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- 实时荧光定量PCR服务
- 山东
- 2025年12月25日
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- 提供商：
菲优特检测
- 服务名称：
实时荧光定量PCR服务
- 规格：
样
实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)，简称Q-PCR，是一种在扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物的总量，通过内参或者外参法对待测样品中的特定基因序列进行定量分析的方法。
实时荧光定量PCR服务流程
1)样品核酸提取，PCR引物设计与合成
2)引物调试(预实验)
3)PCR扩增检测
4)数据汇总初步分析
标准品合成及标准曲线构建(绝对定量)
样本寄送
新鲜或保存完好的样品——细胞：≥1×106，组织≥20 mg，血液≥200μl。组织样品用液氮速冻后保存于-80℃，细胞也可以在加入Trizol后保存于-80℃，后续样品需用干冰寄送。样品需要注意避免各类污染和反复冻融。
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文献和实验1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15
实时荧光定量PCR从1996年美国AppliedBiosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法
miRNA实时荧光定量PCR 实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems公司推出实时荧光定量PCR技术以来，该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中，成为研究RNA必不可少的实验手段之一。目前比较常用的方法有两种：（1）TaqMan荧光探针法：该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当探针完整时，荧光基团发光被淬灭基团吸收；在PCR扩增过程中，探针被降解，荧光基团与淬灭基团分离，发出可被检测到的荧光，以此来监测整个
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