BCA法蛋白浓度检测试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括BCA法蛋白浓度检测试剂盒说明书在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：BCA法蛋白浓度检测试剂盒说明书
英文名：Protein Quantitation Kit By BCA
规格：200次|500次|2500次|5000次
编号：ALH371
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
本试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。

试剂盒组份(500次)：
蛋白标准（5mg/mlBSA）—————0.5ml
溶液A—————————————50ml×2
溶液B—————————————2ml

产品特点：
1.步骤简单，45分钟内完成测定，比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。

注意事项
1. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用精确度高的加样枪。
2. 溶液A和溶液B混合成工作液时可能会有浑浊，但充分振荡混匀后就会消失，成为淡绿色的透明溶液。
3. 需酶标仪一台，测定波长为540-590nm 之间，562nm 最佳；需96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整A 液，B 液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
4. BCA 蛋白定量试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保无EGTA，EDTA 低于10mM，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA
法时建议使用Bradford 法蛋白定量试剂盒。还可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
5. 为了加快BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
6. 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请试用Bradford 法蛋白定量试剂盒。

储存条件：-20℃，有效期1年。

本品别名：改良BCA法蛋白定量试剂盒|BCA法蛋白浓度测定试剂盒|BCA法蛋白浓度检测试剂盒|改良BCA蛋白检测试剂盒

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·荧光定量反转录PCR试剂盒(两步法)
编号：ALH191
英文名称：Two Steps SYBR Green qRT-PCR Kit
规格：50μl×25次|50μl×50次
本系统由两个试剂盒组合而成。一个是第一链cDNA高效合成试剂盒（ALH262）,一个是2×SYBR Green qPCR Mix（ALH185）。首先由反转录第一链试剂盒合成cDNA，然后以cDNA做模板用2×SYBR Green qPCR Mix进行荧光定量PCR扩增。

储存条件：-20℃。

·大量植物样本DNA提取试剂盒
编号：ALH151
英文名称：Plant Massive DNA Rapid Extraction Kit
规格：10次
本试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速大量地提取基因组DNA。可在1小时左右完成一个或多个1g

新鲜或200mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚*仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多

糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的植物组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，

再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组份：
RNaseA———————500μl
缓冲液AP1——————50 ml
缓冲液AP2——————20 ml
缓冲液AP3/E—————40ml
漂洗液WB——————25ml×2
洗脱缓冲液EB————20ml
吸附柱AC——————10个
收集管(50ml)—————10个

产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的*酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.数种去多糖、多酚成份和多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

注意事项：
1. 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
2. 缓冲液AP3/E 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般1g新鲜组织典型产量可达30-260μg。
4. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存

在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

储存条件：室温，有效期12个月。


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·动物组织细胞免DNA提取PCR试剂盒
编号：ALH203
英文名称：Animal Tissue PCR Kit(Free of DNA Extraction)
规格：100次|500次
本试剂盒采用独特的裂解缓冲液快速裂解动植物组织，释放的DNA无需纯化便可以作为模板，用高度耐抑制物的2 × Direct PCR Mix扩增，扩增产物可直接上样电泳。动植物组织（哺乳动物，海洋动物，昆虫等）、细胞、唾液、毛发等。使用简单，高通量筛选；一般扩增大小<2.5kb

试剂盒组分(100次)：
缓冲液AD1—————————0.75 ml
缓冲液AD2—————————7.5ml
2×Direct PCR Mix—————1ml
双蒸水(PCR级)———————10ml

注意事项:
1. 如果扩增条带较弱，可以适当增加或者减少模板加入量，裂解混合物模板一般可以在1μl～4μl内调节。
2. 如果非特异扩增较多，可调整退火温度，或者适当增减模板用量。
3. 各溶液使用完毕后，应该立刻盖紧盖子，以免PH改变影响质量。

储存条件：-20℃。


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·大量组织细胞RNA提取试剂盒
编号：ALH021
英文名称：Massive Total RNA Extraction Kit From Cell & Tissue
规格：10次
本试剂盒在无*酚、*仿RNA快速提取技术基础上，又采用基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。本大量RNA提取试剂盒的柱子样本处理量是普通提取的20倍，独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

试剂盒组分：
裂解液RLT Plus————>100ml
去蛋白液RW1——————>120ml
漂洗液RW———————>25ml×2
70%乙醇————————>15ml×2
RNase-free H2O—————>10ml
基因组DNA清除柱和收集管————>10套
RNase-free吸附柱和收集管————>10套

储存条件：室温，有效期6个月。

产品特点：
1.不需要使用有毒的*酚，*仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在60分钟内完成。
3.独特研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均可在室温完成，使用可容纳50ml 离心管的离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过100mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过6x107细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如细胞不超过6×107，组织不超过200mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留,本试剂盒由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留（一般电泳EB 染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁,请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱上进行DNase I处理。请联系我们索取具体操作说明书。
5. RNA 纯度及浓度检测:
完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。动物rRNA大小分别约为5kb和2kb，分别相当于28S和18S rRNA。动物RNA样品中最大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。

纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。

浓度：取一定量的RNA，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA 浓度的计算 终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40

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