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- 北京
- SY0279-ZWO
- 2025年07月14日
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冷藏
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长期
- 英文名：
One Step Pcr Cloning Kit
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227
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")一步法(快速/无缝)克隆试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
名称：一步法(快速/无缝)克隆试剂盒说明书
产地：国产|进口
规格：25T
编号：SY0279
英文名：One Step Pcr Cloning Kit
一步法（快速/无缝）克隆试剂盒是一款简单、快速、高效的DNA定向克隆产品，该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点，可高效克隆50 bp～10 kp片段。将载体在克隆位点进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列，使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列 (15 bp～20 bp)。将这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合，在重组酶Exnase的催化下，仅需反应30 min即可进行转化，完成定向克隆。克隆阳性率可达95%以上。克隆载体酶切产物或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。
试剂盒中包含有重组反应所需缓冲液和重组酶Exnase，Exnase中添加了独特的重组增强因子，显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞 (107 cfu/μg)也可实现高效克隆 (100 cfu/ng Vector)，而且Exnase还兼容常规酶切、PCR反应体系。
一步法（快速/无缝）克隆试剂盒可用于快速克隆、高通量克隆、无缝克隆和DNA定点突变。
产品组份：
5×CE Buffer——————100μl
Exnase——————50μl
500 bp control insert (25 ng/μl)——————5μl
pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μl)————5μl
实验流程概览
1) 线性化克隆载体制备；
2) 插入片段扩增引物设计；
3) 插入片段PCR扩增；
4) 进行重组反应；
5) 反应产物转化、涂板；
6) 克隆鉴定。
图一 实验流程概览
注：插入片段PCR扩增时，引物5’端引入线性化克隆载体末端同源序列 (图中以蓝色和橙色标记)，使得扩增产物5’和3’最末端序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致。
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：一个试剂盒 50T 试剂盒存储/稳定性：未开封试剂盒储存于-15～-25℃可稳定至标签上标明的效期。 试剂 TUNEL 反应混合物 转化-POD 储存和稳定性 TUNEL 反应混合物应在用前临时配制，不能储存 TUNEL 反应混合物用前应置于冰上 一旦融化转化-POD 溶液后，应储存于 2-8℃（最长稳定 6 个 月） 注意：禁止冰冻结冰 优点： 优点 灵敏 特异 快速 简便 灵活 特点 在单个细胞水平检测细胞凋亡的早期间断 对坏死来说，优先标记凋亡 分析
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