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- 2025年11月15日
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文献和实验性笔在组织周围画圈，然后滴加稀释好的一抗，如果做阴性对照实验，就在对照组的组织上滴加 PBS。加完一抗后于 4 °C湿盒中孵育过夜。（抗体的最佳稀释比应预先通过实验确定，时间控制在 15h 以上）。 PBS 冲洗切片 3 次，每次 3 min，吸水纸擦干切片后滴加辣根过氧化物酶标记二抗 ，37 ℃ 孵育 30 min。 信号检测 PBS 冲洗切片 4 次，每次 3 min，甩去 PBS 液体后吸水纸擦干切片，每张切片滴加新鲜配制的 DAB 显色液，显微镜下观察，阳性信号为棕黄色或棕褐色，时间
修复时，需等待液体缓慢恢复至室温。 （5）冰冻切片未进行复温：冰冻切片应先于室温放置到复温后再浸泡至PBS中。 Q9：染色强度不均匀怎么办？ （1）切片厚度不均匀：切片的厚薄不一，可能导致染色呈现一边强，一边弱的情况。 （2）DAB 染色液未混匀：DAB 在样本上的浓度不一致，导致染色不均匀，加完显色液后最好将片子来回左右晃动几下，使片子上所有区域的底物浓度一致。 （3）试剂未完全覆盖样本：边缘易由于未覆盖而导致无染色或弱染色。免疫组化笔画圈应距组织边缘大于 3～4 mm，试剂要充分覆盖组织，应超出
重蒸水 至1000ml 配制方法：先以少量重蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。 该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。 5、Tris缓冲生理盐水（Tris Buffered，Saline
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