TA快速连接试剂盒(pUC-T)销售

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")TA快速连接试剂盒(pUC-T)销*(代"售")，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：TA快速连接试剂盒(pUC-T)销*(代"售")
规格：20次
编号：WE0249
英文名：pUC-T TA Cloning Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
  pUC-T TA载体是一种高效克隆PCR产物的专用载体，它是由pUC18载体在EcoR V酶切位点处切开，在两侧的3"端添加T而成。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"端添加一个A，它可以与pUC-T 3"端的T互补连接，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。
  试剂盒中配备高效率的T4 DNA Ligase和为快速高效DNA连接优化的2×Quick Ligation Reaction Buffer。连接效率相当于用T4 DNA Ligase 进行常规连接1小时。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入。克隆后可以用BcaBEST Sequencing Primers和 M13通用引物对PCR产物进行测序。

试剂盒组成：

 

组份	20次
pUC-T(50ng/μl)	20μl
Control Insert(50ng/μl)	10μl
Quick T4 DNA Ligase	20μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	120μl

注意事项：

1、Insert DNA 要求
1)连接使用的PCR片段3’末端应带有“A”尾。有些高保真DNA聚合酶，如我公司的Pfu扩增的PCR产物是平滑末端，可使用加A试剂盒加上A尾后，再进行T载体克隆。
2)PCR产物建议进行切胶回收纯化后再进行T载体克隆，以免PCR产物中的非特异片段或残存引物等杂质影响。推荐使用WE0168快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒。

2、连接反应要求
1)本试剂盒能使大多数连接反应在25℃条件下5分钟甚至更短时间内达到反应终点，增加反应时间反应效率不会增强。如用快速连接反应1小时后，转化效率会明显降低；如25℃快速连接反应过夜，则转化效率会下降到75%。
2)2×Quick Ligation Reaction Buffer含有ATP，使用前置于冰上使其融化后充分混匀，建议初次使用分装成小管冻存，避免其反复冻融影响DNA连接效率。
3)由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深，以免粘在枪头上造成损失。
4)如快速连接产物用于电转，因快速连接反应体系中的PEG会影响电转效率，建议使用离心柱将连接产物进行DNA纯化(如WE0170快速DNA产物纯化试剂盒)后再进行电转。

3、感受态细胞要求
建议使用高效的热击转化感受态细胞，这样才可能得到比较理想的阳性克隆，如需进行蓝白筛选，宿主细胞必须具有正确的基因型(F´编码的【lacZ ΔM15】)产生ω片段，才能与载体DNA产生的LacZ α 多肽结合，表现出β-半乳糖苷酶活性(α互补)。pUC-T TA载体以pUC18载体为基础构建而成，因此，适合pUC18载体的感受态细胞都可以使用。推荐使用本公司WE0251 TOP10感受态细胞、WE0252 DH5α感受态细胞。

4、阳性克隆筛选
阳性DNA片段成功插入至pUC-T Vector中后，一般情况下β-半乳糖苷酶的表达将受到破坏，重组克隆体在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB固体培养基上培养时将显示白色菌落。但有时比较短的DNA片段插入载体时，基因的读码框有可能正好与LacZ的读码框相吻合，克隆体也会显示蓝色菌落。

5、阳性对照
为了确认实验操作的正确性，以及实验试剂的有效性，我们建议使用本试剂盒中配备的Control Insert(750 bp)进行阳性对照实验。

使用方法：

1、按以下体系配制反应液：

成分	反应体系	对照体系
pUC-T	1μl	1μl
DNA 插入片段	0.1 -0.3 pmol	--
Control Insert DNA	--	1μl
2×Quick Ligation Reaction Buffer	5μl	5μl
Quick T4 DNA Ligase	1μl	1μl
RNase -Free Water	补足至10μl	补足至10μl

注：Insert DNA的使用量：在进行克隆时，Vector DNA和 Insert DNA的摩尔比一般为：1:2-1:10，可根据实验情况选择适当的Vector DNA和 Insert DNA的摩尔数比。Insert DNA的使用量=nmol数×660×Insert DNA bp数。本载体1μl(50ng)的摩尔数约为0.03 pmol。

2、轻轻混合，短暂离心。25℃反应5分钟。
注意：反应时间不要超过15分钟，否则会降低连接效率。
3、反应结束后，将DNA连接产物存放于0-4℃，而后进行转化实验；也可将DNA连接产物置于-20℃保存。
注意：勿进行加热失活反应。
4、将连接产物加入50μl感受态细胞中(将感受态细胞置于冰上融化)，冰浴30分钟。
注意：用化学法转化时，连接产物的加入量不要超过感受态细胞体积的10%。
5、42℃热击45秒钟，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6、加入450μl无菌SOC或LB培养基，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟，使菌体复苏。
7、根据实验要求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有X-Gal、IPTG和Amp的LB固体培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃，直至液体被吸收后，倒置培养，37℃培养12-16小时。
8、计算白、蓝色菌落，挑选白色菌落，使用PCR法或酶切法鉴定插入片段是否正确。



储存条件：-20℃。

我公司的TA快速连接试剂盒(pUC-T)销*(代"售")，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
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ARB11971 大鼠c-Jun*基末端激酶(JNK)免费代测 Rat c-jun n-terminal kinases,jnk ELISA KIT
γ-亚麻酸 Fmoc-Tyr(tBu)-OH 506-26-3
每支添加于100ml马铃薯葡萄糖琼脂培养基基础中。，用于酵母菌、霉菌的计数"
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1398-61-4 Chitin 几丁质
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3α羟基类固醇脱*酶 Squalene 9028-56-2
F040103 牛血清白蛋白偶联三聚"青"胺 BSA-MEL
BL0887 兔抗豚鼠IgG免疫血清
乙二醇双(2-*基乙基)四乙酸四* Ammonium ferric sulfate dodecahydrate 13368-13-3
D-泛醇 Potassium sodiu*(代"m") tartrate tetrahydrate 81-13-0
TA快速连接试剂盒(pUC-T)销*(代"售")关键词：pUC-T,TA快速连接试剂盒(pUC-T),WE0249,pUC-T TA Cloning Kit


·miRNA提取试剂盒
编号：WE0195
英文名称：miRNA Purification Kit
规格：50次
  本试剂盒专用于从各种动物组织、植物组织、细胞、血清、血浆等样本中分离纯化miRNA， 还可以提取siRNA，snRNA等其他小于200nt的小分子RNA，同时也可用于总RNA的提取。本品将酚/胍裂解技术和硅基质膜纯化技术相结合，独特的裂解液在有效抑制RNases的同时，可以通过有机抽提的方法除去细胞或组织样品中的大部分DNA和蛋白。对于一些敏感的下游实验中，如需富集miRNA可适用该试剂盒单独对miRNA进行富集。本品适用样本范围广，制备的RNA纯度高，可直接用于敏感的下游应用，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。

试剂盒组成：

组份	50次
TRIzon Reagent	60ml
Buffer RWT(浓缩液)	15ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
吸附柱RS及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

自备试剂：*仿、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响miRNA提取的量和质量。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RWT和Buffer RW2中加入无水乙醇。
4、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

操作步骤：

方法一：miRNA富集(可直接用于敏感的下游实验)
1、样品处理
①组织：将组织在液氮中磨碎。每30-50 mg组织加1ml TRIzon Reagent，震荡混匀。样品体积不超过TRIzon Reagent体积的十分之一。
②单层培养细胞：吸去培养液，加入TRIzon Reagent，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent(裂解液用量视培养瓶面积而定)。
③细胞悬液：离心得到细胞沉淀，弃上清。每5×106-1×107细胞加入1ml TRIzon Reagent(细胞不需洗涤)。
④血浆或血清：取200μl血浆或血清样本，加入5倍体积TRIzon Reagent，震荡混匀30秒。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使其充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、可选步骤：4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，取上清，转入一个新的离心管(自备)中(如样品中含较多蛋白、脂肪、多糖等，可选做此步骤)。
4、向上清中加入*仿，每使用1ml TRIzon Reagent加入200μl*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置5分钟。
5、4℃ 12000rpm离心15分钟，样品分为三层：红色有机相，中间层，无色水相，将上层无色水相移到一个新的离心管(自备)中。
6、向步骤5得到的溶液中加入1/3倍体积的无水乙醇， 混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RM中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，离心后弃掉吸附柱RM，保留流出液。
7、向步骤6得到的溶液中加入2/3倍体积的无水乙醇，混匀。
8、将上步所得溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱RS。若一次不能将全部溶液加入吸附柱，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
9、向吸附柱RS中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇)，12000rpm离心30秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
10、向吸附柱RS中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RS重新放回收集管中。
11、重复步骤10。
12、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RS置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RS中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱RS置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μlRNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤13。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RS中，重复步骤13。

方法二：总RNA的提取(提取的总RNA包括miRNA等其他<200 nt的小分子RNA)
1~5步骤同方法一。
6、向步骤5得到的溶液中加入1.25倍体积的无水乙醇，混匀。
7、将上步所得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中。若一次不能将全部溶液加入吸附柱RM中，请分多次转入。12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
8、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RWT(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
9、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
10、重复步骤9。
11、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤的目的是将吸附柱RM中残留的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱RM转入新的无RNase离心管中，向吸附柱中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，室温 12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，得到的RNA溶液保存在-70℃，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Water体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱RM中，重复步骤12。

储存条件：室温(15～30℃)。


TA快速连接试剂盒(pUC-T)销*(代"售")关键词：pUC-T,TA快速连接试剂盒(pUC-T),WE0249,pUC-T TA Cloning Kit


·RRX标记驴抗大鼠IgG(H+L)
编号：WE0369
英文名称：Donkey Anti-Rat IgG, Rhodamine Red-X Conjugated
规格：100μl
本产品为RRX标记的经抗原亲和纯化的驴抗体，特异识别大鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低。Rhodamine Red-X(RRX)是近年新开发的一种荧光素，被激发后产生较明亮的红色荧光。它比普通的荧光更加明亮，更加不容易淬灭，且背景更低。由于其发射波长介于Cy2(或FITC)和Cy5中间，且重叠较少，RRX可与Cy2和Cy5一起用于同一样本的多重标记检测。

免疫原：大鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：Rhodamine Red-X，Amax=570; Emax=590
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)

·SDS-PAGE快速电泳液
编号：WE0277
英文名称：Fast SDS-PAGE Running Buffer(10×)
规格：500ml
  SDS-PAGE是蛋白质科学研究中最为常用的技术之一，使用常规SDS-PAGE电泳缓冲液(TG，Tris-Glycin系统)进行电泳时，电泳所需的时间一般为90分钟左右(mini胶)，应用本产品可使同样的mini胶的SDS-PAGE所需的电泳时间缩短至20-30min，同时电泳后的条带较使用常规的TG电泳缓冲液所跑出的条带分辨率提高且更加清晰。本产品的使用非常简单，只需将您使用的常规TG电泳缓冲液系统更换为本产品的稀释液，调整电压后进行电泳即可，无需添加任何实验步骤。同时稀释为工作液的本产品可重复使用4-5次。本产品既可节省您宝贵的时间也可降低您的实验成本。

注意事项：
1、操作时请务必佩戴手套，如溅到皮肤上，请立即用大量水冲洗。
2、本产品中含有SDS，适合变性凝胶电泳，不适合非变性凝胶电泳。
3、应用本产品所进行的SDS-PAGE的结果显示，本产品的应用会使蛋白的分辨范围发生变化，同等浓度的凝胶，其分辨的最低分子量要小于使用TG电泳缓冲液(见下表)。

操作步骤：(以Bio-Rad mini胶及相关配套设备为例)
1、本产品为10倍浓缩液，使用时用纯水10倍稀释后配制成工作液(例如：取100ml本产品后用纯水定容至1 L)。
2、将适量的本产品加入到电泳槽的内、外槽中，调整电源为恒压200-250 V进行电泳。电泳指示剂*酚蓝至凝胶底部，所需时间约20-30 min。
3、电泳完成后收集电泳槽内、外槽电泳液，4℃保存，可重复使用4-5次，但如发生浑浊请勿使用。

表1 速泳电泳液与常规TG电泳液的最佳分辨率的比较

凝胶浓度

速泳电泳液

常规TG电泳液8%

20-250 kDa

50-325 kDa10%

15-140 kDa

30-180 kDa12%

10-80 kDa

20-140 kDa15%

5-70 kDa

12-100 kDa

储存条件：室温

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