实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(高含量ROX校正染料

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(高含量ROX校正染料)说明书在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：实时荧光定量PCR的预混体系(探针法)(高含量ROX校正染料)说明书
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：WE0146
英文名：BaldStar TaqMan Mixture(High ROX)
规格：5ml
  本品是专用于探针法(TaqMan，Molecular Beacon等)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含BaldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列检测，如基因表达分析，拷贝数分析，SNP基因型分析等，适用于不同类型探针法荧光定量。本品含有的BaldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免了在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，显著提高了PCR的扩增效率，荧光信号更强，灵敏度更高，可以检测单拷贝的模板。使用本产品可以得到更广的线性范围，对目的基因定量更准确。适用于无需ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。

  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR 扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
不需要ROX校正的仪器(WE0144)：
Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-rad iCyler iQ，iQ5，CFX96等。
需要Low ROX校正的仪器(WE0145)：
ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System，QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
需要High ROX校正的仪器(WE0146)：
ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

产品组成：

 

组份	WE0144-5ml	WE0145-5ml	WE0146-5ml
2×BaldStar TaqMan Mixture	5×1ml	5×1ml	5×1ml
50×Low ROX	-	200μl	-
50×High ROX	-	-	200μl
ddH2O	5×1ml	5×1ml	5×1ml

注意事项：
1．使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2．避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaldStar Taq Man Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Probe，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
50×Low ROX or High ROX(可选)	1μl	1×
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以在0.1-1.0μM作为设定范围的参考。
2)使用的探针浓度，与使用的荧光定量PCR仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。
3)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
4)不同仪器的激发光学系统有所不同，根据使用荧光定量的仪器选择加入50× Low ROX or 50×High ROX。

2、PCR反应程序：
注意！本产品预变性反应必须在95℃ 10分钟下完成！

两步法PCR：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min

注意：
1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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BL0832 HRP标记人白蛋白抗体
B1001 驴血清(辐照灭菌) 100ml/200ml/500ml/500ml*20瓶
结合珠蛋白 TBHBA 9087-69-8
8-羟基喹哪啶 PPT 826-81-3
三*乙酸 Phenylhydrazine hydrochloride 76-05-1
BTN130629 RecJf核酸外切酶 RecJf Exonulease
BTN100947 环状DNA全基因组扩增试剂盒 Circular DNA WGA Kit
西玛津 ACH 122-34-9
F020233 山羊抗人IgG Fab抗体 Goat Anti-Human IgG Fab
ARB14021 植物玉米素(Z)Elisa分析 
ARB11700 人硫*(代"酸")脑苷酯(SFT)elisa检测说明书 Human sulfatide,sft ELISA KIT
ARB11552 人恙虫病抗体IgG(STA-IgG)含量检测 
甲*(代"酚")红 CAMP 1733-12-6
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·6×UltraStain上样缓冲液
编号：WE0211
英文名称：6×UltraStain Loading Buffer
规格：500μl|500μl×5
  本产品在常规6×Loading Buffer中添加了UltraStain染料，该染料是一种生物大分子，不能穿透细胞膜进入细胞内。相对于EB的强诱变性，是一种安全无毒的核酸染料。使用6×UltraStain Loading Buffer替代原始Loading Buffer时，在制胶过程中无需加入EB等核酸染料，只需要将DNA与6×UltraStain Loading Buffer混匀即可进行凝胶电泳。由于UltraStain与EB具有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置，在正常紫外光激发检测即可，使用非常方便和灵活。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、由于该染料只需在电泳前与DNA混匀，无需加入凝胶中，可使制备的凝胶保存时间更长。
2、由于Loading Buffer中染料的量远高于将染料加入凝胶中的量，对DNA的灵敏度更高。

操作步骤：
1、配置合适浓度的琼脂糖凝胶
2、吸取5μl DNA样品与1μl 6×UltraStain Loading Buffer混匀后，直接电泳于上样孔内，进行常规电泳和图像采集。


图为向Super DNA Ladder(货号：WE0243)中添加1μl 本产品，在不加染料的TAE缓冲液配置的琼脂糖凝胶中的电泳图

储存条件：2～8℃避光


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137-08-6 (Vitamin B5)  D-Pantothenic acid D-泛酸*
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J0302 兔抗猴IgG(H+L)抗血清 1ml/10ml
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ARB12983 小鼠抑瘤素M(OSM)elisa测定使用说明书 Mouse oncostatin-m,osm ELISA KIT
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3458-28-4 D-Mannitol  D-甘露糖
CYB161072 猴IgG(冻干粉)

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