探针法microRNA qPCR试剂盒，无ROX

一、试剂盒简介
本试剂盒是采用探针法 qPCR 对 microRNA 表达进行定量检测的专用预混型试剂。试剂盒中包含与 EZ-press microRNA Reverse Transcription Kit 系列试剂盒（货号为：EZB-miRT4 和 EZB-miRT1）配套的通用型反向引物和探针，仅需自行设计一条正向引物，就能够很好地用于 microRNA 的定量检测。本试剂盒的 2× EZ-Probe qPCR Master Mix for microRNA 包含具有超强扩增能力和抗干扰能力的化学法热启动的 DNA 聚合酶和高度优化的缓冲液体系，极大地减少非特异性扩增。使用本产品进行 qPCR 反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的扩增曲线，对microRNA 表达进行准确的定量检测，特异性、灵敏度高，重复性好，可信度高。

二、产品组分

 
 
三、保存条件
本试剂盒建议置于-20℃避光保存。收到试剂盒以后，如果近期使用不多，建议将探针分装为 3 ~ 4 管，避光冻存于-80°C。


四、试剂盒特点
1. 特异性高、定量准确：荧光探针只与目的序列结合，理论上探针法的荧光信号只来源于目的序列，即不受非特异性产物的影响，因此，探针法qPCR的特异性非常高，定量准确。
2. 实验耗时短：因探针法qPCR的高特异性，故无需再设置熔解曲线检测扩增产物的特异性如何，大大缩短了实验时间。
3. 兼容多重PCR反应：不同波长的荧光报告基团可以标记不同的探针，因此可以在同一个反应体系中利用不同荧光标记的探针同时检测多个靶标，达到节省实验成本的目的。


五、注意事项
1. 实验开始前首先简单验证引物是否适用：主要通过观察扩增曲线及Ct 值，扩增曲线正常、且 Ct 值在合理范围内（通常为 13 ~ 32 之间）的一般可以认为引物可用。
2. 引物验证后应该分装为几份，防止污染或降解。
3. microRNA 的质量及 cDNA 的质量对 qPCR 的结果具有很大的影响，应尽量防止 microRNA 降解，通常建议 RNA 提取后立即进行逆转录，且避免反复冻融。如果预计使用量较大，则可以一次多逆转几管 cDNA。如果不立即使用 cDNA，则建议保存在-80°C（有利于长期稳定保存）。
4. 各个组分在使用前都要上下颠倒混匀，短暂离心至管底。由于酶保存液中含有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使枪头插入液面过深，否则会因枪头壁粘着造成损失，而使酶量不足。
5. 当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
6.  配制反应液时，试剂请于冰上放置。
7. 本试剂盒使用的DNA聚合酶是化学修饰型热启动的DNA聚合酶，必须需要PCR反应前的95℃、5分钟的酶的活化反应。