北京现货实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京现货实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里卖在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京现货实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里卖
规格：5ml
英文名：BaReSYBR Mixture
品牌：百奥莱博
编号：WE0140
产地：国产|进口
  本品是专用于染料法(SYBR GreenⅠ)实时荧光定量PCR的预混体系， 浓度为2×， 包含HotStar Es Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料和Mg2+，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列的检测。本品中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。经独特方法处理的热启动DNA聚合酶和专门的PCR缓冲液使本品具有特异性高的特点，满足常规荧光定量检测。该产品应用范围广，适用于无需ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。

产品组成：

 

组份	5ml
2×BaReSYBR Mixture	5×1ml
ddH2O	5×1ml

注意事项：
1、使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2、本产品中含有荧光染料SYBR Green I，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
3、避免反复冻融本品，反复冻融可能使产品性能下降。本产品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
4、本品不能用于探针法荧光定量PCR。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：
 

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaReSYBR Mixture	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.2μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.2μM
Template DNA	2μl
ddH2O	up to 50μl

注意：
1)通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)通常DNA模板的量以10-100ng基因组DNA或1-10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

2、PCR反应程序：
两步法PCR：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	15 s	35-40个循环
退火/延伸	60℃	1 min
融解曲线分析	95℃	15 s
	60℃	1 min
	95℃	15 s
	60℃	15 s

注意：
1)本产品所采用的热启动酶需在预变性95℃、5 min条件下实现酶的活化。
2)建议采用两步法PCR反应程序，若提高反应特异性，可提高退火温度，以60-64℃作为设定范围的参考；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以 56℃-64℃的范围作为设定参考。
3)融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

北京现货实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)哪里卖正在火爆热销，除此之外，为您推荐下别热销产品：

·人类基因组DNA
编号：WE0226
英文名称：Human Genomic DNA
规格：20μg
本产品是一类高纯度的基因组DNA提取物，琼脂糖凝胶(0.7%)电泳检测显示该DNA提取物大小在15Kb以上，且基本无降解，可广泛应用于PCR、酶切、杂交、微阵列分析等分子生物学实验。

·dNTP混合溶液(10 mM)
编号：WE0159
英文名称：dNTP Mix(1mM each)
规格：1ml|5ml
  本产品为高质量的脱氧核苷酸(dNTP)的混合物，包括等摩尔的dATP、dGTP、dCTP、dTTP。经过PCR检测的脱氧核苷酸，可与所有的耐热聚合酶配套使用。其中高纯dNTP纯度均达到99%以上，超纯dNTP纯度均达到99.9%以上，不含DNase和RNase。

使用方法：
dNTP(10 mM each)可直接使用，或用调节至中性(PH7.5 左右)的无菌超纯水稀释至适当浓度使用。可用于PCR反应、Real-time PCR、DNA序列测定、分子标记、cDNA合成等。

储存条件：-20℃。

·TOP10感受态细胞
编号：WE0251
英文名称：TOP10 Competent Cell
规格：100μl×10支
  本产品是大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。TOP10是一种常用于质粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因产物可与载体编码的β-半乳糖苷酶*基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，适用于高效的质粒DNA克隆并能保证高拷贝质粒的稳定复制。

产品组成：

组份	0.1ml×10支
TOP10 Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。


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·Cy3标记山羊抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0383
英文名称：Goat Anti-Mouse IgG, Cy3 Conjugated
规格：100μl
本产品为Cy3标记的经抗原亲和纯化的山羊抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链，可以与TRITC使用相同的滤光片。使用本产品检测灵敏度高，本底低。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：Cy3 bis-NHS ester，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：50-400)

·DNA产物快速纯化试剂盒
编号：WE0170
英文名称：DNA Product Quick Clean-up Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方，通过离心吸附柱快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从PCR产物或酶反应液(酶切，连接，探针标记等)中纯化回收100 bp-10 kb的DNA片段，每个吸附柱最高可吸附10μg的DNA，同时最大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化回收的DNA纯度及浓度高，完整性好，回收率高，可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer PB	30ml	120ml
Buffer PS	15ml	60ml
Buffer PW(浓缩)	6ml	25ml
Buffer EB	10ml	30ml
离心吸附柱DM及收集管	50套	200套

产品特点
1、快速简单：操作步骤少，15分钟完成，同时可处理多个样品，节省时间。
2、回收率高：新型硅基质膜技术和试剂配方保证每次最大量回收到纯度极高的目的DNA。
3、处理量大：每个离心吸附柱每次最多可吸附的DNA 量为10μg。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，更长时间保存可置于2- 8℃。当溶液低温保存时,使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
2、本试剂盒可无选择性回收溶液中所有DNA片段，如需选择性回收特定片段，同时去除其他不同大小片段，请选择我公司的胶回收试剂盒(WE0168)
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer PB是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、回收效率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少，洗脱体积越少，回收率越低。
6、所有离心步骤均可室温下进行。

操作步骤：
1、估计DNA反应液的体积，加入5倍体积的 Buffer PB，充分混匀(无需去除石蜡油或矿物油)。
注意：
1)如DNA反应体系为50μl(不包括石蜡油体积)，则加入250μl Buffer PB。
2)在加入Buffer PB后检测溶液的pH值，若pH值＞7.5，可向其中加入10-30μl的3 M醋酸*(pH5.0)，从而将pH值调到5-7。
2、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，13000rpm(~～～16200×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3、将步骤1中所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置1分钟，13000rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：吸附柱容积为750μl，若样品体积大于750μl可分批加入 。
4、向吸附柱中加入500μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)13000rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如果纯化的DNA用于盐敏感实验(例如平末端连接实验或直接测序)，建议加入Buffer PW后静置2-5分钟再离心。
5、13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
6、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中，向吸附膜中间位置悬空滴加30-50μl Buffer EB，室温放置1分钟。13000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。
2)为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟。
3)洗脱体积不应小于30μl，体积过少会影响回收效率。
4)回收＞10 kb的DNA片段时，Buffer EB应在50℃水浴中预热，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。

储存条件：室温(15～30℃)。


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·X光暗盒(12.7cm×17.8cm)
编号：WE0301
英文名称：X-Ray Cassette(12.7 cm×17.8 cm)
规格：一套

·cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)
编号：WE0234
英文名称：NGS Library Quantification Kit for Illumina
规格：1ml|5ml
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液，试剂体系完整，操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

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