北京Pfu DNA Polymerase厂家价格

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应北京Pfu DNA Polymerase厂家价格，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：Pfu DNA Polymerase

产品名	产品编号	包装规格
Pfu DNA Polymerase	WE0107	500U

产地：国产|进口

英文名：Pfu DNA Polymerase

规格：500U

  Pfu DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和5"-3"外切核酸酶活性的同时具有3"-5"外切核酸酶活性，因此在DNA扩增过程中具有纠错能力，是目前发现的错配率最低的耐高温DNA Polymerase。该酶与Taq DNA Polymerase相比具有更好的热稳定性，对于高GC含量模板，提高变性温度对它活性无影响。使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。本产品适用于基因克隆、基因定点突变、SNP和末端补平等实验。

 

产品组成：

 

组份	500U
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl
10×PCR Buffer	1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

 

活性定义：

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

 

质量控制：

1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；

2、经检测无外源核酸酶活性；

3、PCR方法检测无宿主残余DNA；

4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；

5、室温存放一个月，无明显活性改变。

 

使用方法：

以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

 

1、PCR反应体系

 

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
Pfu DNA Polymerase, 5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：

1)用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2)Pfu酶3"-5"外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。

 

2、PCR反应条件

 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

 

注意：

1)Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。

2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。

3)Pfu酶具有3"-5"外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，延伸时间根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增延伸速率为1 kb/min。

4)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

5)本产品具有3"-5"外切核酸酶活性，PCR产物3’端不带“A”,不能直接用于T/A克隆，如需进行T/A克隆则需要在其末端添加“A”或用平末端载体进行克隆。

 

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

北京Pfu DNA Polymerase厂家价格专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

关键词：Pfu DNA Polymerase,WE0107

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编号	类别	名称
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WE0123	核酸扩增(PCR)	高效热启动DNA聚合酶
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WE0203	RNA纯化	DNA/RNA提取试剂盒
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WE0128	核酸扩增(PCR)	高效cDNA第一链合成试剂盒(微量样本)
WE0122	核酸扩增(PCR)	FastStar热启动DNA聚合酶
WE0302	蛋白质研究	定影粉
WE0133	核酸扩增(PCR)	cDNA第一链合成试剂盒(去除基因组DNA)
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WE0284	蛋白质研究	1.5 M Tris-HCl缓冲液(pH8.8)
WE0248	克隆与表达	DNA快速连接试剂盒
WE0205	DNA纯化	磁珠法DNA纯化回收试剂

 

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