- ￥172 - 322
- 晶抗生物
- JK_C6377
- 国内
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Pfu DNA Polymerase(含预混Mg2+的10×Pfu Buffer)
- 保质期：
3年
- 保存条件：
低温保存
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 库存：
大量
- 规格：
250 U, 2.5 U/ul / 500 U, 2.5 U/ul
| 规格： | 250 U, 2.5 U/ul | 产品价格： | ￥172.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 500 U, 2.5 U/ul | 产品价格： | ￥322.0 |
Pfu DNA Polymerase(含预混Mg2+的10×Pfu Buffer)
产品特点
Pfu DNA Ploymerase 是从克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大肠杆菌中表达并经过柱纯化分离出来的重组蛋白，其分子量为 90kD。该酶具有3’→5’核酸外切酶活性，能纠正 DNA 扩增过程中产生的错配，是目前已发现的所有耐热DNAPolymerase中出错率最低的。
该酶无 5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反应中的延伸速度一般为0.5-1kb/min，比 Taq DNA Ploymerase 要低。该酶热稳定性更好，95℃1 小时仍保持90%以上的活性，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃而不影响其活性。使用该酶进行 PCR 扩增得到的产物为平末端，不能直接用 TA 载体克隆。
成分规格
|
产品组成 |
规格 |
|
Pfu DNA Polymerase |
250Ｕ/ 2.5U/μl |
|
10 × Taq Plus Buffer（含 Mg2+） |
1m / 2*1 ml |
|
-20℃，有效期 1 年 | |
|
本产品仅供科研使用 ，不得用于其它用途 | |
使用方法
（注 意：以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化）
1. PCR 体系：
推荐体系（50μl）
|
试剂 |
用量 |
|
模板 DNA |
< 1μg |
|
10 ×× Pfu Buffer |
5μl |
|
dNTP Mixture(2.5 mM each) |
4μl |
|
Primer 1 (10 μM) |
2μl |
|
Primer 2 (10 μM) |
2μl |
|
Pfu DNA Polymerase (2.5 U/μl) |
0.5 ~ 1μl |
|
ddH2O |
Up to 50μl |
注 意：
A. 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可 提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
B. 镁离子浓度请以终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板 来调节镁离子浓度，由此优化反应体系）
2. PCR 程序
|
过程 |
温度 |
时间 | |
|
预变性 |
94℃ |
5min | |
|
25－35cycles |
变性 |
94℃ |
30sec |
|
退火 |
55－65℃ |
30sec | |
|
延伸 |
72℃ |
1kb/60sec | |
|
终延伸 |
72℃ |
5min | |
注 意：
Ａ. 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
b. 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Taq DNA Polymerase的扩增效率为 1 kb/60 sec。
C. 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数）
3. 结果检测：
反应结束后取 5 μl 反应产物，加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
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文献和实验The Polymerase Chain Reaction (PCR)
• Template DNA • Reaction buffer (Tris, ammonium ions(and/or potassium ions), magnesium ions,bovine serum albumin) • Nucleotides (dNTPs) • Primers • DNA polymerase (usually Taq) PCR In Detail • Denature, anneal, extend and repeat the cycle 30 to 35
We report a simple homogeneous fluorescence assay for quantification of DNA polymerase function in high throughput. The fluorescence signal is generated by the DNA polymerase triggering opening of a molecular beacon extension of the template
用过invitrogen 的 accuprime pfx 高保真酶吗？ （紧急求助）请大家帮帮忙，为何高保真酶扩不出 takara pyrobest高保真taq酶批一个2.5kb的目的片断的难题 上海Sangon Taq+Pfu酶扩增产量如何？？？ 请教：关于病毒的pfu和TCID50 求助：TCLD50为10－6如何换算为PFU？ TAQ和PFU PCR的退火温度应该相差不大吧？ Pfu扩增为何总是失败 关于Pfu DNA polymerase的延伸时间 pfu高保真
