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PriCells：正常大鼠原代心肌细胞培养

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  • 中国武汉
  • 正常大鼠原代心肌细胞培养
  • 2025年11月04日
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    • 提供商：

      PriCells

    • 服务名称：

      正常大鼠原代心肌细胞培养

    • 规格：

      1 ML

    PriCells – 正常大鼠原代心肌细胞培养
    一、实验试剂
    1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement
    2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO
    3、洗涤液： 1×PBS（pH 7.4）+ 1% P/S
    4、染色液： 0.4% Trypan Blue
    5、消化液： PriCells Isolation of Primary Cell Kit
    6、检测试剂：一抗小鼠抗大鼠α-横纹肌肌动蛋白，二抗FITC标记山羊抗小鼠IgG，乙醇bing酮混合液（1∶1）
    二、实验器械
    1、培养皿
    2、培养瓶
    3、直剪和眼科剪
    4、眼科镊
    5、200目网筛
    6、玻璃滴管
    7、烧杯
    8、15ml离心管
    三、实验流程
    取材
    ↓
    取心肌组织放入D-Hanks中洗涤3次
    ↓
    剪碎至1mm 3+消化液（PriCells）
    ↓
    37℃水浴8min，吸弃上层悬液（非心肌细胞）
    ↓
    余下组织加消化液（PriCells） 37℃磁力搅拌10min，60r/min
    ↓
    上层悬液加消化终止液（PriCells）
    ↓
    余下组织再加消化液（PriCells）继续消化3-5次
    ↓
    收集所有混悬液过200目网筛
    ↓
    收集滤液1000RPM/10min
    ↓
    去上清，收集沉淀，2ml培养基重悬
    ↓
    染色计数
    四、实验操作
    1、培养瓶预包被。试验前一天预包培养瓶，置于超静台吹干或45℃烘箱烘干（切记保持无菌），4℃冰箱放置，备用。
    2、取材：出生1—3天幼鼠。
    3、材料预处理：将获取的心脏放入含有1% P/S的1×PBS（pH 7.4）中，剪去心房，反复洗涤，至心室内无血渍，洗涤液澄清为止。
    4、消化：将心室肌用眼科剪剪成1mm 3大小组织块，加入消化液10ml，37℃水浴8min后，吸取上层混悬液遗弃；余下组织加入消化液10ml，37℃水浴并用磁力搅拌器搅拌10min；吸取上层混悬液，终止反应；剩余沉淀物再加消化液消化3-5次，直至组织块完全消化。
    5、终止消化：按1∶1加入消化终止液，中止酶反应。
    6、收集重悬细胞：收集中止后的消化液于离心管中，1000 rpm，离心10 min，弃去上清，加入培养液重悬，染色计数细胞。
    7、培养细胞密度：调整细胞密度以5 × 10 5个/ml 接种入培养瓶。
    8、培养：放置于37℃，5% CO 2培养箱中。
    五、细胞鉴定
    1、显微鉴定：接种后12h细胞形态变为梭形或不规则扁平状，24h后即可看到单个细胞的自发收缩，继而细胞逐渐铺展伸出伪足，形成不规则的星形，到第3～4天，细胞相互接触交织成网，形成细胞单层或细胞簇。
    2、免疫组织化学鉴定：利用α-横纹肌肌动蛋白抗原检测。
    3、细胞爬片。将洗净的盖玻片放入6孔培养板中，接种细胞为3×10 4个/孔，48小时候细胞可以长满，用镊子取出铺满细胞的盖玻片备用。
    4、细胞固定：用PBS洗涤细胞，之后放入乙醇bing酮混合液中，固定10min，空气中自然干燥。
    5、特异性抗体：按照说明书稀释比要求稀释抗体，加入抗体，放置4℃孵育过夜。
    6、洗涤：1×PBS（pH 7.4）洗涤3次×15分钟，晾干。
    7、标记性抗体：加入荧光标记抗体，37℃孵育1h。
    洗涤：1×PBS（pH 7.4）洗涤3次×15分钟，晾干。
    8、封片：封片剂封片。
    9、镜检：荧光显微镜下观察，可见胞浆呈棕黄色染色，表明细胞对α-横纹肌肌动蛋白的表达呈阳性。
    六、注意事项
    1、选用出生1-3d的幼鼠。
    2、在取出心脏之前给实验鼠进行消毒处理。
    3、采用多次消化，直到组织块完全消化，减少消化液对细胞的损伤。
    4、由于心肌细胞只占总细胞的25%，在接种心肌细胞之前做差速贴壁，除掉大部分成纤维细胞。
    5、初分离获得的心肌细胞在生理浓度的钙离子溶液中易丧失收缩活性, 为了保持心肌细胞的收缩功能, 在分离的过程中应采用4℃的无钙离子Hanks＇缓冲液浸泡和冲洗心肌组织。
    七、 PriCells 细胞图片
    产品细节图片1 产品细节图片2


    产品细节图片3 武汉原生原代生物医药科技有限公司（原生原代，PriCells）于2009年成立。位于湖北省武汉市东湖高新技术开发区东湖国家自主创新示范区域，总部设立在武汉国家生物产业基地（即光谷生物城——光谷智慧健康园。

    作为中国专业的、专注的研发--生产--销售多种属组织源性细胞产品和提供细胞检测技术服务的生物医药企业，率先独立起草和制定了“基于多种属组织源性细胞分离、培养、运输和检测的PriCells技术流程”的行业专业标 准，已被国际权威学术机构认可，被中国的学术机构和企业单位广泛应用。研发和生产的细胞产品主要面向科研院所、生物技术公司、制药企业研发中心和临床医疗机构。

    原生原代（PriCells）—— 细胞产品潜心研发已长达12年

    原生原代（PriCells）—— 细胞产品推向市场突破1000余种

    原生原代（PriCells）—— 细胞产品使用客户单位突破600余家

    原生原代（PriCells）—— 细胞产品学术文章引用累计数突破1180余篇

    产品细节图片4 产品细节图片5 产品细节图片6

    联系人：曹经理
    电 话：18702725700（微信同号）
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    网 站：www.pricells.com.cn（可点击企业官网）

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