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- KALANG
- 中国大陆
- KL-D7979
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
低温运输,-20℃保存
- 保质期：
一年
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
500U
末端脱氧核苷转移酶
产品简介:末端脱氧核柑转移酶 TdT是一种模板非依赖型DNA聚合酶,催化在寡核苷酸、单链和双链DNA的3’-OH重复添加脱氧核糖核苷酸。TdT反应需要含有至少3个碱基的短序列作为引物。以RNA为模板时,TdT性能严格依赖于受体RNA 3’-末端的三级结构和核柑酸的种类。总的来说,TdT对RNA模板的作用效率比DNA模板低。
此产品特点是:
1.通过Okayama-Berg 法给载体或cDNA加上互补同聚尾。
2.线性双链DNA的各类3’-OH末端同聚物加尾。
3.寡聚脱氧核苷酸和DNA标记
4.5’-RACE(快速扩增cDNA末端)
5.凋亡反应的原位定位。
质量标准:
无endodeoxyribonucleases,exodeoxyribonucleases,phosphatases and ribonucleases污染。SDS-PAGE下呈单一带,纯度>99%。
活性单位定义:
1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmo脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。酶活性分析混合物:200mM二甲胂酸钾(pH7.2),1mM CoCl2,0.01%(v/v)Triton×-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP和0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
Buffer成分:
储存Buffer:100mM醋酸钾(pH6.8),2mM 2-cay巯基乙醇,0.01%(v/v)Triton ×-100和50%(v/v)afi甘油。反应Buffer,5×:1M二甲胂酸钾,125mM Tris,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2(pH7.2,25℃)。
运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年。
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文献和实验（一）原理 凋亡细胞是由于内源性核酸内切酶的激活后，将DNA 切割成许多双链DNA 片段以及高分子量DNA 单链断裂点（缺口），暴露出大量3- 羟基末端，如用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT ）将标记的dUTP 进行缺口末端标记，则可原位特异地显示出凋亡细胞。主要应用的是荧光标记法和酶标记法。 （二）荧光标记法 1 ．材料与试剂 采用德国Boehringer-Mannheim 公司In Situ Cell
原位末端转移酶标记技术 （ISEL）检测细胞凋亡 根据细胞凋亡时核酸内切酶被激活，将细胞核染色体DNA从核小体连接处切断，产生单股或双股DNA链。根据这一生化特性，将外源性核苷酸和酶（末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和DNA聚合酶I或Klenow大片段）渗入到凋亡细胞中，催化标记的外源性核苷酸与断裂的 DNA链相结合，并通过一定的显示系统显色。 由于凋亡细胞内的内源性核酸酶被激活后，将自身染色体或DNA切割，产生与DNA断裂数目相同
置于湿盒中）；同时设立对照： A）阴性对照：每一实验均应设立对照，每孔加50μl标记液（无末端转移酶）代替TUNEL反应混合物； B）阳性对照：每一实验均应设立对照，用微球核酸酶或DNA酶I处理已固定/透化的细胞（1μg～1mg/ml，室温10min），以诱导DNA链断裂。37℃孵育 30min； PBS洗3次； 单个转换和分析：标本吹干，加50μl转换POD（注意要在单层细胞上均匀分布POD，为避免蒸发，将玻片置于湿盒中）37℃ 30min，PBS洗3次，加50～100μl
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