T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)特价促销

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名称：T4多聚核苷酸激酶(T4 PNK)特价促销
英文名：T4 Polynucleotide Kinase
编号：YT513
规格：100U|500U
产地：国产|进口
本酶是一种多聚核苷酸5"羟基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基团向单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"羟基转移。其他NTP也可产生相同的反应：5"-OH + NTP → 5"-P + NDP。

上述的磷酸化反应是可逆的。当缺失ATP并且存在ADP的情况下，T4 Polynucleotide Kinase可以显示出5"磷酸酯酶的活性，催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"磷酸基团向ADP的转移形成ATP。其他NTP也可产生相同的反应：5"-P + NDP → 5"-OH + NTP(最适pH为6.4左右)。

当ATP和ADP都适量存在时，T4 Polynucleotide Kinase可以催化单链或双链DNA、RNA、寡核苷酸或带有3"磷酸基团的单核苷酸的5"磷酸基团和ATP的γ位磷酸基团之间的交换反应。其他NTP也可产生相同的反应：5"-P + NTP + NDP→5"-P + NDP + NTP。T4 Polynucleotide Kinase同时具有3"磷酸酯酶活性，可催化3"磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3"-P → 3"-OH + Pi(最适pH为5.9左右)。T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。

产品组份：
T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl) ——————100U
Reaction Buffer A(10X)————————————80μl
Reaction Buffer B(10X)————————————40μl
24% PEG Solution———————————————40μl

用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5"末端标记，用作Southern、Northern、EMSA等的探针，凝胶电泳的marker，DNA测序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5"端磷酸化，确保后续连接反应顺利进行；催化3"磷酸化的单核苷酸的5"磷酸化，使该单核苷酸可以和DNA或RNA的3"末端连接；去除3"端磷酸基团。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为T4嗜菌体。
活性定义：37℃30分钟内，将转移ATP上1 nmol γ-磷酸基团转移到DNA 5"-OH末端所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl2，5mM DTT，0.5mM 5"-OH DNA，0.05mM ATP，0.1MBq/ml [γ-33P]-ATP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
酶储存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反应)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at 25℃)，100mM MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA。
Reaction Buffer B(10X)(用于交换反应)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at 25℃)，0.18M MgCl2，50mM DTT，1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
失活或抑制：75℃加热10分钟可使T4 Polynucleotide Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50mM的KCl和NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
储存条件：-20℃。

注意事项：
1. 铵盐沉淀获得的DNA不能用于T4 Polynucleotide Kinase的标记反应。铵盐可强烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
2. PEG可促进磷酸化反应速率和效率；交换反应体系应加入PEG。

使用说明：
1. DNA 5" 末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待磷酸化DNA—————————————————1~20pmol (5" 末端)
Reaction Buffer A (10X)———————————2µl
[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)————20pmol
补充无核酸酶的去离子水 ———————————至19µl
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)——————1µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

2. DNA 5’ 末端磷酸化：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待磷酸化DNA————————————————1~20pmol (5" 末端)
Reaction Buffer A (10X)——————————2µl
0.1mM ATP—————————————————1µl
补充无核酸酶的去离子水 ——————————至19µl
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)—————1µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

3. 通过交换反应(exchange reaction)进行DNA 5" 末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待磷酸化DNA——————————————————1~20pmol (5" 末端)
Reaction Buffer B (10X)————————————2µl
[γ-32P or γ-33P]-ATP (3,000Ci/mmol)—————40pmol
24% PEG Solution ———————————————4µl
补充无核酸酶的去离子水 ————————————至19µl
T4 Polynucleotide Kinase (10U/µl)———————1µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 加入1µl 0.5M EDTA (pH8.0)混匀，以终止反应。
e. 后续可以使用酚*仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。

4. 其它用途可以参考上述用途或相关文献资料进行。

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·YT™免疫荧光染色二抗稀释液
编号：YT888
英文名称：YT™ Secondary Antibody Dilution Buffer for Immunofluorescence
规格：100ml
本品是最新一代的快速高效封闭液，总体 效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、血清等的二抗稀释液，可以用于免疫荧光 (Immunofluorescence，IF)检测时二抗的稀释和配制。

YT™免疫荧光染色二抗稀释液可以有效节约二抗 。经本产品稀释的二抗可以在2-3周内重复使用3-5次。

YT™免疫荧光染色二抗稀释液稀释的二抗孵育后背景极低 。本封闭液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。

YT™免疫荧光染色二抗稀释液兼容性好，兼容各 种荧光标记的二抗。同时本产品不含生物素，也不会干扰基于生物素的荧光检测。

YT™免疫荧光染色二抗稀释液使用便捷。本产品 无需添加任何额外的试剂，可以直接用于二抗的稀释。


图1. YT™免疫荧光染色二抗稀释液用于免疫荧光(IF)的检测效果图。上图为HeLa 细胞用一抗α-Tubulin Rabbit Polyclonal Antibody和二抗 Cy3标记的山羊抗兔IgG(H+L)进行免疫荧光染色的检测 效果图。图中可见非常清晰的红色荧光的微管形态。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异， 图中数据仅供参考。

按照每次二抗稀释需要5-10ml二抗稀释液计算，一个包装的 YT™免疫荧光染色二抗稀释液可以稀释10-20次二抗。

注意事项：
1. 为进一步提高信噪比，推荐同时使用YT™免疫染色封闭液(YT886)和YT™免疫染色一抗稀释液(YT887)用于封闭及一抗的稀释。
2. 为了能使稀释的二抗可以反复多次使用，二抗孵育结束后稀释的二抗应立即存放在 4℃，以便于后续重复使用。

储存条件：4℃，有效期一年。


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·免疫荧光染色二抗稀释液
编号：YT090
英文名称：Immnol Fluorence Staining Secondary Antibody Dilution Buffer
规格：100ml
本品可以用于免疫荧光染色时荧光标记二抗的稀释。经本免疫荧光染色二抗稀释液稀释的荧光标记二抗可以在4℃保存和使用不少于六个月，可以反复多次用于免疫荧光染色，节约您宝贵的抗体。

按照每个二抗稀释10毫升计算，一个包装的免疫荧光染色二抗稀释液可以稀释10个或10次二抗。

注意事项：为了能使抗体可以反复多次使用，建议尽量在4℃进行荧光标记二抗的结合反应，以减缓荧光标记二抗的衰减速度。

储存条件：4℃，有效期一年。

·中性红染色液(活细胞染色用)
编号：YT915
英文名称：Neutral Red Staining Solution(Living cell staining)
规格：100ml
本染色液是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成红色的染色液。本染色液配制在pH值较接近中性的，并且和普通的细胞培养液等渗的溶液中，可以用于外周血细胞的活体染色，也可以用于其它活体细胞或组织的染色。本染色液经过滤除菌，可以直接用于培养细胞的染色。中性红同时也是一种pH指示剂，在酸性时呈红色，在pH6.8-8.0时呈黄色。细胞核中的核酸呈酸性，因此细胞核会被染成红色。由于溶酶体(lysome)中也是酸性环境，因此溶酶体也是可以被酸性红染色液染成红色的。如果每样需使用0.5ml本染色液，一个包装的本染色液可检测200个样品。如用于涂片的染色，至少可染色500个样品。

CAS：553-24-2
分子式：C15H17IN4
分子量：288.8

注意事项：第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。

储存条件：4℃避光，有效期一年。

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