北京细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)说明书

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名称：北京细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒(柱式吸附)说明书
产地：国产|进口
英文名：DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column
规格：50次
编号：YT121
本试剂盒是目前最先进的DNA Ladder抽提试剂盒之一。本试剂盒是针对细胞凋亡过程中产生的核小体间DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提最小片段为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到最大50kb左右的基因组DNA。本试剂盒可以抽提50个样品。

DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。

样品首先被蛋白酶K消化，随后加入适合DNA结合到纯化柱上的缓冲液，然后加入到纯化柱内。通过高速离心，使DNA在穿过纯化柱的瞬间，结合到纯化柱上，随后通过两次洗涤去除各种杂质，最后通过洗脱液把DNA洗脱下来。整个过程无需酚氯*(代"仿")抽提，无需酒精沉淀，样品裂解后仅需约15分钟即可完成。

通过DNA纯化柱方式抽提DNA ladder比用传统的酚氯*(代"仿")抽提酒精沉淀方法更加便捷，小片段DNA不容易损失。试剂盒提供了RNase A，可以获得不含RNA的高纯度总DNA，排除了RNA对DNA ladder观察造成的干扰。

本试剂盒每次最多可以抽提20mg组织或200-350万个培养细胞。样品用量过多，反而会影响抽提效果。纯化柱对于DNA的最大容量约为30微克。通常每200万Hela细胞或500万淋巴细胞可以抽提得到15-25微克总DNA，每25mg肝、脑、肾组织可以抽提得到10-30微克总DNA，每25毫克心、肺组织可以抽提得到5-10微克总DNA，每10mg脾组织可以抽提得到5-30微克总DNA。样品的用量请勿超过纯化柱的容量，样品用量最好能保持在纯化柱容量的70%或以下。当然过少的样品也不利于检测到DNA ladder。

对于培养细胞的凋亡检测，通常6孔板一个孔的细胞就足够用于DNA ladder的抽提和检测。

试剂盒组份：
样品裂解液A——————10ml
样品裂解液B——————11ml
洗涤液I——————21ml(第一次使用前加入7ml无水乙醇)
洗涤液II——————16ml (第一次使用前加入24ml无水乙醇)
洗脱液——————22ml
蛋白酶K——————1.1ml
RNase A——————220μl
DNA纯化柱及废液收集管——————50套

注意事项：
1. 温度较低时样品裂解液A或样品裂解液B中可能会有沉淀产生，属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混匀后使用。
2. 第一次使用前洗涤液I需添加7ml无水乙醇，洗涤液II需添加24ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
3. 本试剂盒需使用55℃或70℃水浴，请提前作好准备。
4. 除特别说明外，每次Vortex应控制在5-10秒左右。
5. 本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
6. 废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

储存条件：室温，有效期一年。( 蛋白酶K需-20℃保存)

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β-环糊精 Phenyl Sepharose 6 Fast Flow (low sub) 7585-39-9
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·C/EBP凝胶迁移探针(1.75μM)
编号：YT208
英文名称：C/EBP Probe For EMSA(1.75μM)
规格：60μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的C/EBP consensus oligonucleotide。这个双链寡核苷酸含有公认的C/EBP结合位点，可以用作EMSA研究时的探针。一个包装的探针可以进行约30个同位素标记探针的反应，每次标记的探针可以测定约100个样品；或约可以进行20个生物素标记探针反应。如果作为未标记的探针用于同位素标记探针的冷竞争，可以进行30-60个冷竞争反应。

C/EBP consensus oligo的序列如下：
5"-TGC AGA TTG CGC AAT CTG CA-3"
3"-ACG TCT AAC GCG TTA GAC GT-5"

本EMSA探针可以使用T4 Polynucleotide Kinase在[γ-32P]ATP存在的情况下进行标记，也可以用于生物素标记。

注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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