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印迹级试剂可产生特异性结果, 消除了 Western 印迹免疫检测中的假阳性现象。优点包括:
- 双重亲和纯化的印迹级抗体经亲和层析分离, 通过对非亲缘物种的交叉吸收进一步纯化以去 除非特异免疫球蛋白。
- 印迹级抗体耦联物的高效价提高了检测灵敏 度。稀释液(1:3,000)降低了背景并增加了 测试的信噪比。
用Bio�Rad 印迹级试剂检测western 印迹膜上的抗原。两块相同凝胶上的蛋 白转印到硝酸纤维膜上。上样的蛋白为:泳道1,低分子量标准品;泳道2 和6,生物素化标准品;泳道3,人体转铁蛋白;泳道4,E.coli 裂解液;泳 道5,人体全血清。印迹膜A 用Bio�Rad 总蛋白胶质金染剂染色。印迹膜B 用Immun�Blot 测试法和生物素化标准操作流程测试,兔抗人转铁蛋白 为初级抗体。二级抗体溶液包括Bio�Rad 印迹等级的抗兔HRP 耦联物 和亲和素�HRP 耦联物。经抗体和亲和素�HRP 处理,只有转铁蛋白条 带和生物素化标准品可被检测到。
A 蛋白和G 蛋白耦联物
A 蛋白和G 蛋白是细菌表面蛋白,它们与IgG 分子的Fc 区段结合。由于A 蛋白和G 蛋白可与许多物种的免疫球蛋白结合,因此它们对使用来自多个物种或不常用实验动物的初级抗体的实验室特别有用。根据免疫蛋白来源物种不同,每个试剂都有不同的IgG 结合能力。
A 蛋白和G 蛋白耦联物的结合特异性
| 免疫球蛋白 | A蛋白 | G蛋白 |
| 人IgG1 | •• | •• |
| 人IgG2 | •• | •• |
| 人IgG3 | ― | •• |
| 人IgG4 | •• | •• |
| 小鼠IgG1 | •/― | • |
| 小鼠IgG2a | •• | •• |
| 小鼠IgG2b | •• | •• |
| 小鼠IgG3 | •• | •• |
| 大鼠IgG1 | • | • |
| 大鼠IgG2a | ― | •• |
| 大鼠IgG2b | ― | • |
| 大鼠IgG2c | •• | •• |
•• 高度结合 • 弱结合 ― 不结合
单个印迹级试剂
提供用于完成western 印迹杂交实验所需的单个包装试剂。
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