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StarBright 染料标记抗体:助您轻松扩展流式配色方案
StarBright 染料是Bio-Rad开发的特殊荧光纳米颗粒,StarBright染料标记的抗体可以帮助您轻松构建更大、更好的流式细胞配色方案。StarBright 染料被设计为稳定、具有卓越的亮度、窄的激发和发射特性,并且可以灵活地包含在新的和现有的实验中。它们提高了特定细胞群的分辨率,并最大限度地减少了溢出和扩散。StarBright 染料可与高引用度的免疫学抗体偶联,配合您的流式配色选择。- 发射和激发波段窄: 激发波段窄可以最大限度减少荧光溢出,同时也能够减少其他激光的次要激发,均使StarBright成为流式多色的理想选择。

与 PerCP-Cy5.5(红色圆圈)相比,StarBright Blue 700染料的激发减少;
与Brilliant Violet 510(蓝色圆圈)相比,StarBright Violet 515染料的355nm激光的激发减少,发射波段窄。
- 非凡的亮度: 设计为与竞争对手的染料一样亮或更亮。 StarBright星光染料的卓越的亮度允许检测稀有和低抗原密度群体,并能很好地分离阳性和阴性群体。

图1:StarBright染料比竞争对手的染料比较。 A,与竞争对手相比,488、405和355nm可激发StarBright染料的CD4染色示例。B,人外周血的染色指数,用各种405nm可激发 StarBright、Brilliant Violet和Super Bright星光染料与CD4偶联。 在 ZE5 细胞分析仪上生成的数据。
- 一致的染色

图2. StarBright染料——一致、稳定和可固定。无论批次如何,StarBright染料都显示出一致的结果。A,多批次用于用CD4SBV515 (MCA126SBV515)对外周血单个核细胞进行染色,结果叠加在直方图上。虚线是CD4BV510用于比较。B,CD14SBV610 (MCA1267)在对人外周血进行染色之前,在室温下在黑暗或光照下放置长达14天,并将染色与正确储存在冰箱中的抗体进行比较。仅在室温光照下储存14天后,染色减少。C,与新鲜染色的样品相比,不同固定试剂对染色指数没有影响。在ZE5细胞分析仪上生成的数据。
- 灵活性佳,可与所有染色缓冲液兼容

图3. 人外周血在不同缓冲液中的染色示例。 A: 无论缓冲液如何,都没有观察到CD4染色 (MCA1267SBV670)的变化。 B: 在Bio-Rad染色缓冲液或Brilliant Stain buffer的亮染缓冲液, CD4SBV790 (MCA1267SBV790) 都可以很好地工作。在ZE5细胞分析仪上生成的数据。
- 关于常见的免疫表型目标

图4. 使用StarBright染料对常见免疫表型标记物进行染色的示例。 对人外周血进行CD3 (MCA463SBUV400)、CD19 (MCA1940SBUV605)、CD4 (MCA1267SBUV510)、CD8 (MCA1226SBV710)、CD25 (MCA2127SBV440)和CD12 (HCA145A647)染色。以识别B和T淋巴细胞以及T辅助细胞、T细胞毒性细胞和T调节细胞。使用 CD14和CD16鉴定经典、中间和非经典单核细胞。 从CD45RA和CD45RO获得T辅助细胞的进一步表征,以识别幼稚和记忆细胞,并通过CD27和CD28水平测量T调节细胞上的共刺激标记表达。在ZE5细胞分析仪上生成的数据。
| Product code | Fluorophore | Optimal excitation laser | Excitation Max, nm | Emission Max, nm |
| STAR210SBUV400 | StarBright UltraViolet 400 | 355 | 347 | 394 |
| STAR210SBUV445 | StarBright UltraViolet 445 | 355 | 347 | 440 |
| STAR210SBUV510 | StarBright UltraViolet 510 | 355 | 340 | 513 |
| STAR210SBUV575 | StarBright UltraViolet 575 | 355 | 340 | 569 |
| STAR210SBUV605 | StarBright UltraViolet 605 | 355 | 340 | 609 |
| STAR210SBUV665 | StarBright UltraViolet 665 | 355 | 340 | 684 |
| STAR210SBUV740 | StarBright UltraViolet 740 | 355 | 344 | 742 |
| STAR210SBUV795 | StarBright UltraViolet 795 | 355 | 340 | 792 |
| STAR210SBV440 | StarBright Violet 440 | 405 | 385 | 438 |
| STAR210SBV475 | StarBright Violet 475 | 405 | 405 | 479 |
| STAR210SBV515 | StarBright Violet 515 | 405 | 401 | 516 |
| STAR210SBV570 | StarBright Violet 570 | 405 | 402 | 570 |
| STAR210SBV610 | StarBright Violet 610 | 405 | 402 | 607 |
| STAR210SBV670 | StarBright Violet 670 | 405 | 400 | 667 |
| STAR210SBV760 | StarBright Violet 760 | 405 | 403 | 754 |
| STAR210SBV790 | StarBright Violet 790 | 405 | 401 | 782 |
| STAR210SBB580 | StarBright Blue 580 | 488 | 475 | 582 |
| STAR210SBB615 | StarBright Blue 615 | 488 | 475 | 612 |
| STAR210SBB675 | StarBright Blue 675 | 488 | 476 | 675 |
| STAR210SBB700 | StarBright Blue 700 | 488 | 470 | 700 |
| STAR210SBB765 | StarBright Blue 765 | 488 | 476 | 764 |
| STAR210SBB810 | StarBright Blue 810 | 488 | 477 | 802 |
| STAR210SBY575 | StarBright Yellow 575 | 561 | 548 | 579 |
| STAR210SBY605 | StarBright Yellow 605 | 561 | 572 | 606 |
| STAR210SBY720 | StarBright Yellow 720 | 561 | 548 | 719 |
| STAR210SBY800 | StarBright Yellow 800 | 561 | 549 | 788 |
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文献和实验至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl;等份越小, 储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。 在大多数情况下, 抗体时在 4℃ 下保存一至两周, 然后再冷冻进行长期保存是可接受的, 但也许腹水液是例外, 它可能包含蛋白酶, 因而应该尽快冻存。同样, 遵照数据表上的建议是重要的。 酶偶联抗体不应冻存, 而应保存于 4℃。冻融不仅影响抗体结合能力, 还会降低酶活性。 无论偶联至荧光染料、酶还是生物素, 偶联抗体都应
表面而受到的影响越大。 在大多数情况下,收到抗体时在 4℃下保存一至两周,然后再冷冻进行长期保存是可接受的,但也许腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而应该尽快冻存。同样,遵照数据表上的建议是重要的。 免责条款和其它特别条件: 酶偶联抗体不应冻存,而应保存于 4℃. 冻融不仅影响抗体结合能力,还会降低酶活性。 无论偶联至荧光染料、酶还是生物素,偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响,在实验的所有阶段都应避光
优化后的解离方案。 9. 解离后单细胞悬液质量的优化 单细胞悬液质量是下游实验成功的决定性因素。 单细胞悬液质量不佳会显著影响磁分选、单细胞测序、流式细胞术及类器官移植等关键实验。针对不同质量问题,需采取针对性优化策略: (1)死细胞会和磁珠或者荧光染料非特异性结合,且死细胞会产生自发影响,影响流式分析,可以使用死细胞去死试剂盒Dead Cell Removel Kit Dead Cell Removal Kit(130-090-101)去除死细胞。 (2)细胞团块会粘连单细胞,且细胞团块较大
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