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文献和实验Materials2 ml size Sarstedt screw cap tubesBIO-RAD Disposable Chromatography Column (BIO-RAD cat. #732-6008)Oligo dT celluloseRNase-free water5.0 M NaCl0.5 M EDTA1.0 M Tris, pH 7.410% SDS70% EtOHBefore starting protocol1. Measure out 75 mg of oligo
质,小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时,通过洗杂步骤,即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质,通过改变缓冲液的条件,如pH,或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢?仅达到所需的质量量级,如毫克级(或克级)即可满足吗? 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要,比如,就蛋白的生物活性和纯度而言,通常会有所要求。 以下我们来讨论并且比较2种技术: His-tag系统和Strep-tag®系统,都使用了亲和层析法来纯化
上的其他蛋白质,小分子或是金属。当融合有亲和标签的蛋白通过标签-配体作用结合再层析基质上时,通过洗杂步骤,即可去除掉其他的细胞成分。 为了洗脱所需要的蛋白质,通过改变缓冲液的条件,如 pH,或通过竞争亲和标签和配体连接的方法来进行。 但怎样的纯化是较为成功的呢? 仅达到所需的质量量级,如毫克级(或克级)即可满足吗? 这些并不简单。质在蛋白纯化中同样尤为重要,比如,就蛋白的生物活性和纯度而言,通常会有所要求。以下我们来讨论并且比较 2 种技术:His-tag 系统和 Strep-tag®
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