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- HZbscience
- 中国/美国/德国
- HZ0023
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pET-28a
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5ug
pET-28a
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| HZ0023 | pET-28a | 5μg |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | T7/lac |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori，F1 ori |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒 |
| 质粒大小: | 5369bp |
| 质粒标签: | N-6×His, N-Thrombin, N-T7, C-6×His |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan（50μg/ml） |
| 克隆菌株: | DH5α等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 表达宿主: | BL21(DE3)等大肠杆菌 |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7（TAATACGACTCACTATAGGG） |
| 3'测序引物: | T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG） |
质粒简介
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
质粒图谱
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文献和实验表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具，本文总结了pET-32α（+）载体技术的构建，该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段，将DNA片段亚克隆到pET-32α（+）表达载体中，在大肠杆菌 BL21（DE3）中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进行蛋白质纯化。裂解液。介绍作为分子生物学实验室中非常有用的实践，重组DNA技术（或基因克隆）是指将DNA片段从一种生物体转移到自我复制的遗传元件如表达载体。然后插入的DNA可以在外源宿主细胞中繁殖
相关专题 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株，噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，构建好的表达载体 可以直接转入表达菌株中，诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是IPTG诱导。 2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子，lacUV5启动子可以启动T7 RNA 聚合酶的表达; 3)表达质粒 如pET-28质粒带有T7启动子和编码阻遏
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
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