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- HZbscience
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- HZ0024
- 2025年07月14日
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- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
半年
- 英文名：
pET28a-EGFP
- 库存：
200
- 供应商：
沪震生物
- 规格：
5ug
pET28a-EGFP
产品信息
| 产品货号 | 产品名称 | 产品规格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|
| P0024 | pET28a-EGFP | 5μg |
¥请询价 |
使用说明
基本信息
| 启动子: | T7/lac |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 ori，F1 ori |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠荧光质粒；大肠绿色质粒 |
| 质粒大小: | 6050bp |
| 质粒标签: | N-6×His, N-Thrombin, N-EGFP, C-6×His |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan（50μg/ml） |
| 克隆菌株: | DH5α等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 表达宿主: | BL21(DE3)等大肠杆菌 |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7（TAATACGACTCACTATAGGG） |
| 3'测序引物: | T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG） |
质粒简介
pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。在非诱导条件下，可以使目的基因处于完全沉默状态而不转录。
质粒图谱
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文献和实验-MEM、DMEM培养基和M-MLV逆转录酶；小牛血清；G418；DIG High PrimeDNA Labeling and Detection Starter Kit I1。 质粒 pGL3-promoter；含EBVR的质粒p220.2。 重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR的构建 采用StuI和XbaI消化p220.2，获得长4.7 kb的EBVR，包括EBV核抗原1(EBNA1)和OriP，克隆至pGL3-promotor的SV40启动子下游Hind Ill
静脉注射，病毒注射总量为 1×10^11 vg/小鼠。Luc 的表达由 cTnT 启动子控制。（DOI: 10.1038/gt.2010.105） 图 4. 五种 AAV 血清型在小鼠体内的心脏基因递送效率比较。注射方式为左心室前壁注射，病毒注射总量为 5×10^10 vg/小鼠，体积为 10μL。Luc 的表达由 cTnT 启 动子控制。（DOI:10.1002/jgm.1576） 图 5. 五种 AAV 血清型以不同剂量注射至小鼠体内的心脏基因递送效率比较。注射方式为颈静脉注射。EGFP
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
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