| 出品公司: | ZYbscience |
|---|---|
| 别名: | pet28a, pet 28a, pET-28a(+) |
| 质粒类型: | 大肠杆菌蛋白表达 |
| 表达水平: | 高 |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 5369 bp |
| 5' 测序引物及序列: | T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3' |
| 3' 测序引物序列: | T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3' |
| 载体标签: | N-His, N-Thrombin, N-T7, C-His |
| 载体抗性: | 卡那霉素 |
| 表达宿主菌: | BL21(DE3) 、BLR(DE3)、BL21(DE3)pLysS |
| 备注: | N端含有Thrombin蛋白酶切位点; pET28a, b, c的差异仅仅存在于多克隆位点处。 |
| 产品目录号: | ZY69864-3 |
| 稳定性: | 瞬时表达 Transient |
| 组成型: | 组成型 Constitutive |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- ¥1100
- ZYbscience
- 中国/美国
- ZY69864-3
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃低温保存
- 保质期：
三年
- 英文名：
pET-28a(+)
- 库存：
20
- 供应商：
泽叶生物
- 规格：
5ug质粒
pET28a载体基本信息
pET28a载体质粒图谱和多克隆位点信息
pET28a载体简介
pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His标签。pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。
pET28a载体序列
LOCUS pET-28a(+) 5369 bp DNA Circular SYNDEFINITION pET-28a(+)ACCESSION KEYWORDS SOURCE ORGANISM other sequences; artificial sequences; vectors.COMMENT This file is created by Vector NTI http://www.biofeng.com/COMMENT ORIGDB|GenBankCOMMENT VNTAUTHORNAME|biofeng.com|COMMENT VNTOAUTHORAD1|Novagen Inc.|FEATURES Location/Qualifiers source 1..5369 /organism="pET-28 a (+)" /mol_type="other DNA" terminator complement(1..129) /label="T7_terminator" misc_feature 69..87 /label="T7_Terminal_primer" misc_feature complement(207..239) /label="T7_leader" misc_feature complement(222..240) /label="Xpress_fwd_primer" misc_feature complement(307..323) /label="T7_transl_en_RBS" misc_feature complement(341..368) /label="lacO" promoter complement(368..386) /label="T7_promoter" gene 418..681 /label="tet (300 - 563)" /gene="tet (300 - 563)" misc_feature complement(470..489) /label="pBRrevBam_primer" CDS 523..1023 /label="ORF frame 1" misc_feature 764..1855 /label="lacI" CDS 896..1855 /label="ORF frame 2" gene 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文献和实验相关实验
表达载体的构建是生物技术和所需蛋白质产生的基本工具，本文总结了pET-32α（+）载体技术的构建，该技术通常用于研究实验室。该方法包括获得用于构建载体的外源DNA片段，将DNA片段亚克隆到pET-32α（+）表达载体中，在大肠杆菌 BL21（DE3）中进行蛋白质表达以及在大肠杆菌中在天然条件下进行蛋白质纯化。裂解液。介绍作为分子生物学实验室中非常有用的实践，重组DNA技术（或基因克隆）是指将DNA片段从一种生物体转移到自我复制的遗传元件如表达载体。然后插入的DNA可以在外源宿主细胞中繁殖
相关专题 1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株，噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，构建好的表达载体 可以直接转入表达菌株中，诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是IPTG诱导。 2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因，T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子，lacUV5启动子可以启动T7 RNA 聚合酶的表达; 3)表达质粒 如pET-28质粒带有T7启动子和编码阻遏
dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列，插入PET28A的BamH1和Hind3位点，最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明： 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中，但是该沉淀无色。 少量存在于上清中，上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达，目的蛋白在上清中，并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
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