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上海一基实业有限公司
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文献和实验吸出培养瓶中的培养基,用PBS液洗涤1-2次; 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可); 在镜下看到细胞退缩变园,立即给予少量培养基终止消化,我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化; 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后,按1:2或1:3分瓶即可。
littleyan0418 我现在的任务是要构建人肺癌细胞的cDNA文库,但我不是这个方面科班出身,好多地方还不是很明白,想请教师兄师姐的经验,应该注意些什么。现在对总RNA的提取我有点找不出头绪。麻烦师兄师姐们可以给我分享些这方面的资料和网址吗?非常感谢!! neuronboy http://www.takara.com.cn/ 价格、试剂盒和说明书都有。呵呵 littleyan0418
上皮层。以PBS液漂洗眼杯2次,吸干; 4. 加入0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液,置于无菌的烧杯中。于37℃恒温箱中消化30min; 5. 吸去消化液。用PBS液稍洗。加入有血清培养液终止消化酶的作用,并用毛细吸管轻轻吹打眼杯内壁,以使视网膜色素上皮细胞脱落; 6. 收集眼杯内的细胞悬液,离心(800r/min)8min; 7. 弃上清液,将沉淀的视网膜色素上皮细胞重新用培养液悬浮。计数; 8. 以8×104—10×104
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