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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
6个月
- 英文名:
Transgenic soybean MON87708 strain nucleic acid assay kit (PCR)
- 库存:
10
- 供应商:
沪震生物
【包装规格】24/50/96测试/盒
【类别】PCR-荧光试剂盒
【运输】低温、避光、快递免费送货上门。
【用途】生化实验,合成实验等试验。
转基因大豆MON87708品系核酸检测试剂盒(PCR法)常见问题:
一.没有扩增产物
1.循环温度:变性温度、退火温度
2.引物设计
3.DNA聚合酶活性
4.抑制性成份(蛋白酶、核酸酶、其它抑制聚合 酶活性的成份)
5、DNA样品
二.非特异产物及电泳呈涂布状
1.Mg2 浓度
2.调整引物、模板、聚合酶的用量
3.适当减少循环数
4.适当提高退火温度,缩短退火或延伸时间
转基因大豆MON87708品系核酸检测试剂盒(PCR法)的改进与完善:
Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片段,其缺点是:
①Klenow酶不耐高温,90℃会变性失活,每次循环都要重新加,每加入一次酶只能完成一个扩增反应周期,给PCR技术操作程序添了不少困难。
②引物链延伸反应在37℃下进行,容易发生模板和引物之间的碱基错配,其PCR产物特异性较差,合成的DNA片段不均一。
2)1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行PCR,其扩增的DNA片段很均一,真实性也较高,只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次,仍需加入新酶。
3)1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌(thermus aquaticus) 中提取到一种耐热DNA聚合酶。转基因大豆MON87708品系核酸检测试剂盒(PCR法)此酶具有以下特点:
①耐高温,在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%,在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%,在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。
②在热变性时不会被钝化,不必在每次扩增反应后再加新酶。
③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率,增加了扩增长度(2.0Kb)。由于提高了扩增的特异性和效率,因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别,将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。
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文献和实验PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术,其基本原理是酶促DNA合成反应,即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下,经DNA聚合酶的作用,使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点,但其对实验环境的要求严格,实验成本较高,有时还有假阳性的现象出现。 1、仪器设备 超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、台式离心机、旋涡混悬器等。 2、实验试剂 选用美国Stratagene公司生产的支原体检测试剂盒(内有引物、阳性
不知道大家做突变的时候都用什么方法。有经验的战友不妨来交流一下啊。说说我的先。由于本人没有这方面的经验,所以***求各位战友的意见和建议啊。大家多多批评指正。 我要做一构建好的质粒上约100bp的片段的缺失,利用反向PCR的方法。以下是利用实验室现有资源的实验设计: 1 Phosphorylation of the 5’-end of a primer 10×kinase buffer 2ul primer (20uM) 5ul 10mM ATP 2ul
PCR方法操作简便,灵敏度高,可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。 乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,在我国发病率很高,而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切,因此,HBV的诊断极为重要。PCR检测HBV-DNA敏感性明显高于传统的血清学方法,且能显示HBV在体内复制情况,直接反映患者血液的感染性,并对模棱两可的或与临床表现不符的血清学结果,PCR技术有助于明确诊断。 【材料】 待检
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