• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        PCR法检测乙肝病毒

        互联网

        2992
          PCR方法操作简便,灵敏度高,可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物的检测。
        乙肝病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎,在我国发病率很高,而且HBV与肝硬化、原发性肝癌关系密切,因此,HBV的诊断极为重要。PCR检测HBV-DNA敏感性明显高于传统的血清学方法,且能显示HBV在体内复制情况,直接反映患者血液的感染性,并对模棱两可的或与临床表现不符的血清学结果,PCR技术有助于明确诊断。
          【材料】 待检血清、HBV-PCR反应液 20管(20μl/管)、HBV-DNA裂解液、阳性模板、溴化乙锭、PCR扩增仪、电泳仪、紫外线分析仪。
          【方法】
        1、标本处理:
        取混匀的血清20μl加20μl裂解液,搅匀后100℃沸水浴10分钟,
        最后15000rpm/分钟离心3分钟,取4μl上清待检。
        2、加样及PCR:
          取反应液一管(使用前稍加离心),加4μl待检上清或阳性对照于底层反应液中,混匀后高速离心片刻,然后置94℃预变性2分钟,再按94℃/30
        秒、55℃/30秒、72℃/60秒扩增35个循环。
          3、电泳与结果判断:
          取15μl反应液,经2%琼脂糖凝胶电泳(5V/cm)30分钟后,在紫外灯下观察结果,若410bp处出现橙黄色带,则HBV为阳性。
          【注意事项】
        1、反应管中加好所有 试剂 后,应立即上机扩增,以免形成过多的二聚体。
        2、阳性模板可用阳性 血清 代替,处理方法同上。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序