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上海一基实业有限公司
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文献和实验Primer Extension System - AMV Reverse Transcriptase
Primer Extension System - AMV Reverse Transcriptase The Primer Extension System is used to determine the location and level of a target 5´end of RNA. The System uses AMV Reverse Transcriptase (Cat.# M5101, M5108 and M
检测或定量。另外,这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶分析在内的RNA分析技术,更灵敏,更易于操作。 RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶,以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物(GSP)起始。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在最佳条件下进行。cDNA的合成首先在逆转录缓冲液中进行
中,逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA,然后通过 PCR 反应扩增 cDNA,为下游实验提供研究模板,因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一(如下图)。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率,即便是难转录 RNA 样本,如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的 RNA 样本。 图. 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。RT =逆转录,RTase =逆转录酶 常用的 RT-PCR 方法分为一步法和两步法,每种方法都各有优缺点,简要概述如下: 表. 对比一步法和两步法 RT-PCR 定量 RT-PCR
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