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- DSMZ细胞
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- ACC--1162
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-80℃冻存
- 保质期：
二年
- 英文名：
GBC-SD
- 库存：
20
- 供应商：
上海泽叶生物科技有限公司
- 规格：
1x10^6 cells
细胞英文(简称）:GBC-SD
细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
代次:P3
规格:T25
细胞数:1x10^6 cells
组织来源:胆囊癌
细胞形态:贴壁；上皮细胞样
细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
传代方法:建议:1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
传代细胞培养操作步骤
1、 37度水浴加热所有试剂。
2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使GBC-SD人胆囊癌细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
10、 放入暖箱中继续培养。
细胞计数步骤：
1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
细胞冻存与复苏：
GBC-SD人胆囊癌细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
1．冻存细胞
（1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
（6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
标准程序：
当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
简易程序：
将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
2. 复苏细胞
（1）从罐中取出冻存管。
（2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
（3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
（4）GBC-SD人胆囊癌细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
（5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
| ECACC细胞库 | 88062428 | A 172 | 90110515 | CCD-33Lu | 93120841 | BHK 21 STRAIN 35 | 99072802 | NB69 | 85011403 | PSA1 |
| ECACC细胞库 | 88071302 | JIYOYE | 90110517 | CCD-32Lu | 93120842 | BHK 21 STRAIN 38 | 99072803 | F5-5.F1 | 85011406 | P815-1-1 |
| ECACC细胞库 | 88071401 | IEC 6 | 90110519 | KLN 205 | 93121054 | HaP-T1 | 99072804 | T-3-CI-2-0.fl | 85011407 | K562 cl.6 |
| ECACC细胞库 | 88072203 | Clone 9 | 90110520 | G-7 | 93121055 | HuP-T3 | 6051601 | BICR 18 | 85011408 | B82 |
| ECACC细胞库 | 88090801 | IA-Xs SBR | 90110521 | CF2Th | 93121056 | HuP-T4 | 99072806 | ATDC5 | 85011409 | SV3T3B |
| ECACC细胞库 | 88092904 | H9c2 (2-1) | 90110522 | G-292 Clone A141B1 | 93122323 | PORTHOS | 99072807 | 707.fl | 85011410 | BS1-B4 |
| ECACC细胞库 | 88100507 | BW5147.G.1.4.OUAR.1 | 90110523 | C3H/MCA clone 16 | 93122324 | OVNIS | 99072808 | F-36P | 85011412 | Hep2 (Clone 2B) (HeLa derivative) |
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文献和实验TGF-β介导的癌细胞转移。 实验方法与结果： 1）用200nM micrOFFTM antagomir-20a孵育GBC-SD细胞三天后进行皮下成瘤，成瘤21天后开始进行瘤内注射antagomir-20a，每周两次，一次5 nmol，共注射4次，并在第一次注射的两周后收集肿瘤块。 2）用200nM antagomir-20a孵育GBC-SD细胞三天后进行脾脏种植，种植5周后收集样品检测肿瘤的肝转移
Cell：「来骗来偷袭」剪接体靶向疗法「诱骗」机体，激活抗病毒免疫，让肿瘤自杀
最近，英国皇家康沃尔医院报道了一位霍奇金淋巴瘤患者，在感染新冠病毒后，体内淋巴瘤竟然奇迹般地消退了，这引起了人们广泛的关注。肿瘤究竟是如何消失的呢？这一疑问目前没有得到解答，但研究人员分析，这可能是新冠病毒感染激活了患者体内的抗肿瘤免疫，或者是针对新冠病毒的 T 细胞免疫与肿瘤细胞之间具有交叉反应。如何行之有效得激活人体的免疫系统来对抗癌细胞，实现「肿瘤自愈」，一直都是科学家们奋斗的目标。2021 年 1 月 13 号，美国休斯敦贝勒医学院 Thomas F. Westbrook 团队
、基底较宽的隆起病变。胆囊壁浸润者可见囊壁僵硬或变形。(2)胆囊不显影：多属中晚期病例。(3)胆囊不显影并有肝或肝外胆管狭窄：充盈缺损及梗阻上方肝胆管扩张已是晚期征象。 5．细胞学检查：细胞学检查法有直接取活检或抽取胆汁查找癌细胞两种。直接活检的方法有：B超引导下胆囊病变穿刺、PTCCS(经皮胆囊镜检查)、经腹腔镜等方法。采取胆汁的方法更多，如ERCP下抽取胆汁、B超引导下胆囊穿刺、PTCD、胆道子母镜等。文献报告的细胞学检查的阳性率虽不高，但结合影像学检查方法，仍可对半数以上胆囊
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