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BRL大鼠肝细胞

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  • ¥800 - 2350
  • DSMZ细胞
  • 美国/德国/日本
  • ACC--3004
  • 2025年07月11日
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    • 保存条件：

      -80℃冻存

    • 保质期：

      二年

    • 英文名：

      BRL

    • 库存：

      20

    • 供应商：

      上海泽叶生物科技有限公司

    • 规格：

      1x10^6 cells

    细胞名称:BRL大鼠肝细胞
    细胞英文(简称）:BRL
    细胞来源: ATCC DSMZ JCM ECACC
    代次:P3
    规格:T25
    细胞数:1x10^6 cells
    组织来源:肝
    细胞形态:贴壁；上皮细胞样
    细胞活力:95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
    细胞检测:细胞不含有:HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
    培养条件:RPMI-1640 +10% FBS；37℃，5% CO2
    传代方法:建议1:2-1:3 两天换液一次​
    冻存条件:完全培养基50%+40%FBS+10%DMSO
    传代细胞培养操作步骤
    1、 37度水浴加热所有试剂。
    2、 吸取培养培养皿内旧培养液，放置一个干净离心管内。（为稍后终止消化作准备。）
    3、 用PBS清洗培养皿，弃去。
    4、 向瓶内加入消化液（胰蛋白酶液）。以能覆盖培养瓶底为宜。（一般一个大皿1ml）
    5、 2-5分钟后，轻轻震荡培养皿。使BRL大鼠肝细胞从瓶壁脱离形成细胞悬液。显微镜下观察若细胞由贴壁变为悬浮就加入血清（即原培养液）终止消化。
    6、 收集细胞悬液，880转/分、5分钟离心，弃去上清液。
    7、 加培养液至1ml，混匀后取10ul计数细胞。
    8、 根据实验要求取适量细胞留种或接种于新的培养皿或96孔板、24孔板中，再加入相应体积的培养液。（90mm大皿是9ml，中皿好像是4mm，6孔板和小皿是2ml，96孔板是100ul）。
    9、 接种好的培养皿顺时针和逆时针各转三圈，使细胞排列均匀。
    10、 放入暖箱中继续培养。
    细胞计数步骤：
    1、将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板上.
    2、将细胞悬液吸出少许，用台盼兰溶液对被稀释后滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。(台盼兰用于标记死亡细胞。)
    3、镜下观察，计算计数板八大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
    细胞数/ml＝8大格细胞总数/ 8×2×10000
    细胞冻存与复苏：
    BRL大鼠肝细胞冻存和复苏的原则：慢冻快融
    当细胞冷到零度以下，可以产生以下变化：细胞器脱水，细胞中可溶性物质浓度升高，并在细胞内形成冰晶。
    如果缓慢冷冻，可使细胞逐步脱水，细胞内不致产生大的冰晶；相反，结晶很大，大结晶会造成细胞膜、细胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重结晶。
    　1．冻存细胞
    （1）选对数增生期细胞，在冻存前1d换液。
    （2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×106／m1左右密度，离心，去上清。
    （3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞成再悬液。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，它是一种渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤
    （4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m1悬液。
    （5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，作好标记。
    （6）冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度,在30～40 min时间内,下降到液氮表面，再停30 min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。
    标准程序：
    当温度在-25℃以上时， 1～2℃/min
    当温度达-25℃以下时， 5～10℃/min
    当温度达-100℃时，可迅速放入液氮中
    简易程序：
    将冷冻管（管口要朝上）放入纱布袋内，纱布袋系以线绳，通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口，按每分钟温度下降1～2℃的速度，在40分钟内降至液氮表面，停30分钟后，直接投人液氮中。
    　　操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。
    2. 复苏细胞
    （1）从罐中取出冻存管。
    （2）迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成。
    （3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后,打开盖子,用吸管将细胞悬液注入离心管中,再滴加10 m1培养液。
    （4）BRL大鼠肝细胞低速离心(880r／min) 5 min，去上清后再用培养液洗一次。
    （5）用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。
    　　冻存细胞数量要充分，密度应达到107／m1，在融后稀释20倍后，仍能保持5×105／m1数量。
    DSMZ细胞库 ACC 94 NS20Y ACC 645 SHI-1 ACC 75 BA-D5 ACC 398 BD-215 ACC 455 AC-1M59
    DSMZ细胞库 ACC 56 R1 ACC 307 DV-90 ACC 493 RH-1 ACC 32 KARPAS-422 ACC 158 KB-3-1
    DSMZ细胞库 ACC 262 RGE ACC 418 RT-112 ACC 655 LAN-1 ACC 473 CAT-13.1E10 ACC 252 MONO-MAC-1
    DSMZ细胞库 ACC 350 LOVO ACC 138 MN-60 ACC 250 A-204 ACC 240 CCRF-CEM ACC 421 KG-1a
    DSMZ细胞库 ACC 469 GH3 ACC 172 NRK-49F ACC 557 ROS-50 ACC 642 U-2973 ACC 497 MEC-1
    DSMZ细胞库 ACC 630 GUMBUS ACC 393 LOU-NH91 ACC 274 BF-G6 ACC 227 BT-B ACC 229 SBC-7
    DSMZ细胞库 ACC 284 PYS ACC 499 H-209 ACC 320 L-5178-Y ACC 369 SR-786 ACC 463 JEG-3
    DSMZ细胞库 ACC 588 8709 ACC 19 JVM-13 ACC 513 HCC-1937 ACC 602 L-591 ACC 228 SBC-2
    DSMZ细胞库 ACC 416 C7 ACC 243 SAOS-2 ACC 725 KHYG-1 ACC 600 HNT-34 ACC 500 MEC-2
    DSMZ细胞库 ACC 564 EN ACC 617 SCC-25 ACC 83 DG-75 ACC 58 WSU-NHL ACC 136 KB
    DSMZ细胞库 ACC 112 F9 ACC 419 MFE-296 ACC 376 T-24 ACC 661 UPCI-SCC-172 ACC 134 EM-3
    DSMZ细胞库 ACC 587 7926 ACC 448 CAL-62 ACC 625 BL-2 ACC 663 UPCI-SCC-116 ACC 269 DMBM-2
    DSMZ细胞库 ACC 565 C2C12 ACC 31 KARPAS-299 ACC 7 CML-T1 ACC 475 CAT-13.9C1 ACC 51 DA-1
    DSMZ细胞库 ACC 675 LS ACC 198 COLO-704 ACC 63 COS-1 ACC 388 LCLC-97TM1 ACC 411 32D
    DSMZ细胞库 ACC 106 MH1C1 ACC 82 MC-116 ACC 285 TI-1 ACC 72 L-540 ACC 615 GF-D8
    DSMZ细胞库 ACC 173 3T3 ACC 127 RVH-421 ACC 182 COLO-680N ACC 15 ML-2 ACC 368 FDCP-1
    DSMZ细胞库 ACC 331 M1 ACC 96 YAC-1 ACC 508 RS4;11 ACC 702 SK-GT-2 ACC 271 MUTZ-2
    DSMZ细胞库 ACC 103 N18TG2 ACC 318 N3-36 ACC 612 WSU-FSCCL ACC 664 UPCI-SCC-074 ACC 295 MUTZ-3
    DSMZ细胞库 ACC 192 EBL ACC 611 MOLM-6 ACC 542 NOMO-1 ACC 683 BCBL-1 ACC 692 YNH-1
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