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pLV3-U6-Met(mouse)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro载体/pLV3-U6-Met(mouse)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro质粒图谱/pLV3-U6-Met(mouse)-sgRNA2-Cas9-EGFP-Puro质粒序列
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- 保存条件：
-20℃
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3个月
- 英文名：
Wuhan Miaoling Bioscience & Technology Co.,Ltd
- 库存：
1000
- 供应商：
武汉淼灵生物科技有限公司
- 规格：
20μl
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文献和实验，表达载体pCDNA3，pCDNA3.1(+),pCDNA3.1(-),表达载体pcmv-ha以及表达载体 pCMV-Myc的图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2019694_0.html pMD18-载体图谱：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2993026_0.html pGEX-KG载体图谱序列：http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post
1. 质粒载体构建不成功（目的片段和载体不能成功连接）的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差：体系中的杂质会降低连接效率，如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体，可以考虑进行纯化后再进行连接； ②目的片段和载体片段使用比例悬殊，或者用量过多或过少：目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内，否则会影响连接效率，具体比例可以草靠连接酶说明书； ③连接条件不当：比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等，可以通过设置对照组来排查原因； ④引物设计问题：比如通过无缝克隆的方式进行连接，同源
的，PAGE胶纯化的引物在这里不适用）作为逆转录引物合成cDNA。由于引物中带有T7序列，因此合成的cDNA的3'端也带有T7序列。选用Affymetrix公司提供的Enzo BioArray HighYield RNA Transcript Labeling Kit（Cat. No. 900182，10次标记），通过试剂盒提供的生物素标记的核糖核酸和T7 RNA聚合酶，以体外转录（IVT）的方式扩增并标记cRNA探针。试剂盒提供体外转录和标记的所有试剂，可以作10个反应。标记好的探针经过随机片断
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