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- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海翌圣
- 11139ES70
- 2025年10月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
Hifair III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
200T
产品信息
产品描述
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有基因组DNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase而开发。与HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase相比，HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达12 kb的cDNA。
该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers和oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分 
【注】：1) 5×HifairTM Ⅲ Buffer plus包含dNTP和gDNA digester抑制剂；
2) HifairTM Ⅲ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit （Cat No. 11135ES）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11135ES中的5×HifairTM Ⅲ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) | 11139ES70 | 200 T | -20℃ | 2196.00 |
产品描述
HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有基因组DNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase而开发。与HifairTM Ⅱ Reverse Transcriptase相比，HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达55℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。HifairTM Ⅲ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达12 kb的cDNA。
该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers和oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
| 11139ES70 (200 T) | ||
| 11139-A | RNase free ddH2O | 2×1.2 mL |
| 11139-B | 5×gDNA digester Buffer | 400 μL |
| 11139-C | gDNA digester | 200 μL |
| 11139-D | 5×HifairTM Ⅲ Buffer plus | 800 μL |
| 11139-E | HifairTM Ⅲ Enzyme Mix | 400 μL |
| 11139-F | Oligo (dT)18 (50 μM) | 200 μL |
| 11139-G | Random Primers (50 ng/μL) | 200 μL |
2) HifairTM Ⅲ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
注意事项
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
2）如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制；
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HifairTM Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis Kit （Cat No. 11135ES）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11135ES中的5×HifairTM Ⅲ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
引物选择
1. 若后续为PCR实验
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时，可改用Oligo (dT)18或Random Primers重新进行逆转录。
3）Random Primers特异性较低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，且使用Oligo (dT)18或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random Primers作为引物。
2. 若后续为qPCR实验
建议将Oligo (dT)18和Random Primers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若后续为PCR实验
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
3. 逆转录程序设置
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
1. 若后续为PCR实验
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）基因特异性引物(GSP)的特异性最高。但有些情况下，用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成时，可改用Oligo (dT)18或Random Primers重新进行逆转录。
3）Random Primers特异性较低，所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA均可作为Random Primers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高，或者模板为原核生物来源，且使用Oligo (dT)18或基因特异性引物(GSP)无法有效引导cDNA合成时，可使用Random Primers作为引物。
2. 若后续为qPCR实验
建议将Oligo (dT)18和Random Primers混合使用，可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成，有助于提高定量结果的重复性。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若后续为PCR实验
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | To 10 μL |
| 5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
| gDNA digester | 1 μL |
| 模板RNA | Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng |
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | To 20 μL |
| 上一步的反应液 | 10 μL |
| 5×HifairTM Ⅲ Buffer plus | 4 μL |
| HifairTM Ⅲ Enzyme Mix | 2 μL |
| Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL |
| or 1 μL | |
| or 1 μL |
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 50℃ | 30-60 min |
| 85℃ | 5 min |
2）逆转录温度：推荐使用50℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到55℃。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
二、若后续为qPCR实验
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | To 10 μL |
| 5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
| gDNA digester | 1 μL |
| 模板RNA | Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng |
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | To 20 μL |
| 上一步的反应液 | 10 μL |
| 5×HifairTM Ⅲ Buffer plus | 4 μL |
| HifairTM Ⅲ Enzyme Mix | 2 μL |
| Oligo (dT)18 (50 μM) | 1 μL |
| Random Primers (50 ng/μL) | 1 μL |
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 50℃ | 30 min |
| 85℃ | 5 min |
※ 逆转录产物可立即用于后续qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
HB180306
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文献和实验相关实验
首例cDNA克隆问世以来,已发展了许多种提高cDNA合成效率的方法,并大大改进了载体系统，目前cDNA合成试剂已商品化。cDNA合成及克隆的基本步骤包括用反转录酶合成cDNA第一链,聚合酶合成cDNA第二链,加入合成接头以及将双链DNA克隆到于适当载体(噬菌体或质粒)。 一、RNA制备 模板mRNA的质量直接影响到cDNA合成的效率。由于mRNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性
Hifair III cDNA第一链合成试剂盒(gDNA digester plus) [可申请试用]
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