- ￥236
- 翌圣生物（Yeasen）
- 上海翌圣
- 11123ES10
- 2025年12月26日
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- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
有效期1年
- 英文名：
Hifair Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)
- 库存：
大量
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 规格：
10T
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES10 | 10 T | -20℃ | 236.00 |
| Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) | 11123ES60 | 100 T | -20℃ | 955.00 |
产品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例优化，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最-大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix，Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 11123ES10 (10 T) | 11123ES60 (100 T) | ||
| 11123-A | RNase-free ddH2O | 1 mL | 2×1 mL |
| 11123-B | 5×gDNA digester Buffer | 20 μL | 220 μL |
| 11123-C | gDNA digester | 10 μL | 100 μL |
| 11123-D | 2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus | 100 μL | 1 mL |
运输与保存方法
干冰运输。-20℃保存。
注意事项
1）gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心，吹打混匀。
2）建议RNA是溶于水而不是TE Buffer中，因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应。
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验；
4）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染；
5) 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第一链cDNA合成操作步骤
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | To 10 μL |
| 5×gDNA digester Buffer | 2 μL |
| gDNA digester | 1 μL |
| Total RNA | 1 ng -5 μg* |
| or mRNA | 1 ng-500 ng* |
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
| 组分 | 使用量 |
| 第1步的反应液 | 10 μL |
| 2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus | 10 μL |
标准程序（适用于微量和常规量的模板量）
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 42℃ | 30 min |
| 85℃ | 5 min |
4. 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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| 产品名称 |
货号 |
规格 |
| 11119ES60 |
100 T |
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| 11120ES60 |
100 T |
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| Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) |
11121ES60 |
100 T |
| Hifair®II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) |
11123ES60 |
100 T |
| Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) |
11139ES60 |
100 T |
| Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
11141ES60 |
100 T |
| 11201ES08 |
5 mL |
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| 11202ES08 |
5 mL |
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| 11203ES08 |
5 mL |
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| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，No Rox) |
11195ES08 |
5 mL |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，Low Rox) |
11196ES08 |
5 mL |
| Hieff UNICON® Power qPCR SYBR Green Master Mix ( 抗体法，High Rox) |
11197ES08 |
5 mL |
| 11198ES08 |
5 mL |
|
| 11199ES08 |
5 mL |
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| 11200ES08 |
5 mL |
|
| 11184ES08 |
5 mL |
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文献和实验特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。这使得在较为严紧的条件下可以获得目的模板的部分拷贝。2. stability of primers定制引物的标准纯度对于大多数PCR应用是足够的。引物产量受合成化学的效率及纯化方法的影响。定制引物以干粉形式运输。最好在TE重溶引物，使其最终浓度为100μM。TE比去离子水好，因为水的pH经常偏酸，会引起寡核苷的水解。 引物的稳定性依赖于储存条件。应将干粉和溶解的引物储存在-20℃。以大于10μM浓度溶于TE的引物
RTase 两大类：AMV RTase 的 RNase H 活性强，合成长度短，合成量低，热稳定性好（42～55℃）；MMLV RTase 的 RNase H 活性弱，合成长度长，合成量高，热稳定性差（37～42℃）。由于 RNase H 酶具有降解 RNA 模板的功能，所以在逆转录时应该优先选择 RNase H 活性弱的 MMLV ，而且后期经过基因工程改造，MMLV 热稳定性已达到质的飞跃。以 Yeasen 的 Hifair® Ⅲ 逆转录酶（11141）为例，该酶经基因工程改造，删除了 RNase
扩增出较短的片段，以保证探针的特异性，如下图所示：上游引物下游引物Ⅱ T7 启动子序列下游引物Ⅰ（2）PCR先用上游引物和下游引物Ⅰ进行PCR，再以PCR 产物为模板,用上游引物和下游引物Ⅱ-T7进行二次PCR(具体操作参见PCR章节)。（3）探针合成标记与纯化在0.5ml 离心管中加入下列试剂：RNasin （40U/μl） 0.5μlGACU POOL GAC（含GTP、CTP、ATP各2.75 mM,UTP 61μM） 2μl[α-32P]UTP(10μCi/μl) 2.5μlDTT (二硫
