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上海中科新生命生物科技有限公司
双向凝胶电泳是将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率分离的分析方法。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离,是唯一能同时将上千种蛋白质同时分离和展示的方法,在蛋白质组学中发挥重要的作用。
技术原理
先将蛋白质根据其等电点在pH梯度胶内进行等电聚焦,然后按照它们的相对分子量大小进行SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)第二次电泳分离。电泳后对凝胶进行染色,并用相关软件对图像进行分析处理。
实验流程
注释:“样品及实验预判”包括蛋白质定量、至少一次双向凝胶电泳实验,对样品质量判断及实验条件优化。
使用仪器
第一向IEF:Ettan IPGphor Isoelectric Focusing System(GE Amersham);
第二向SDS-PAGE:Hofer SE 600(GE Amersham);
扫描仪:UMax Powerlook 2110XL (GE Amersham)。
技术优势
经典蛋白质组学方法,蛋白质差异变化直观可见;
经济实惠。
应用领域
疾病标志物筛选 作用机制研究 植物抗逆研究
药物作用靶点研究 特殊功能蛋白质筛选
样品要求
| 样品类型 | 样品要求(/组样品) |
| 蛋白质提取物 | 浓度>4μg/μl,蛋白质总量>5mg |
| 细胞样品 | 细胞量>108 |
| 组织样品 | 湿重>300mg |
| 体液样品 | 血液体积>1ml |
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[3] Gromova I, Gromov P, et al. Proteomic profiling of triple-negative breast carcinomas in combination with a three-tier orthogonal technology approach identifies Mage-A4 as potential therapeutic target in estrogen receptor negative breast cancer. Mol Cell Proteomics. 2013; 12(2): 381-94.
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文献和实验指DNA双链的局部,由具有互补性单链 DNA与之结合所产生的环状结构。当 DNA复制开始,在原来的双链中仅一方被新合成的短 DNA单链被置换的情况下可以见到(为 Displacement loop之简称)。可通过人工使 DNA单链结合来制成此结构。由 RNA单链所产生的类似结构称为 R环。
of each component.2D gel electrophoresis is generally used as a component of proteomics and is the step used for the isolation of proteins for further characterisation by mass spectroscopy. In the lab this technique is used for 2 main purposes, firstly for the large
of each component. 2D gel electrophoresis is generally used as a component of proteomics and is the step used for the isolation of proteins for further characterisation by mass spectroscopy. In the lab this technique is used for 2 main purposes, firstly
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