辉骏生物-蛋白质组学技术服务专业平台—专注蛋白质谱鉴定/亲和

广州辉骏生物科技股份有限公司是一家致力于蛋白质组学研究的技术服务公司，在串联亲和纯化/质谱（TAP/MS），免疫共沉淀（CoIP），Pull down实验，同位素标记相对和绝对定量技术（iTRAQ），氨基酸中稳定同位素标记的细胞培养（SILAC），Shotgun(鸟枪法)LC-MS质谱鉴定，等方面具有深厚研究经验，成功帮助科研工作者，医生等完成数百篇SCI论文的发表。

目前客户的成果已发表在J.Proteome Res.、Proteomics.、J.Hazard.Mater.等专业期刊，我们一直致力于为广大客户提供专业的技术服务，透明的服务价格，和优质的售前售后服务，您的满意永远是我们最终的目的。

一、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）只要以抗体和抗原之间的特异免疫反应为基础，研究蛋白质与蛋白质间相互作用的经典方法。其基本原理是在细胞裂解液中加入抗原特异性的抗体，抗体、抗原、以及与抗原具有相互作用的蛋白质通过抗原与抗体之间免疫沉淀反应将形成免疫复合物，经过纯化，洗脱，收集免疫复合物，SDS-PAGE电泳，western blot和（或）质谱可鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。

辉骏生物服务优势
与其他研究蛋白质相互作用技术（如Pull down、酵母双杂交等）相比，免疫共沉淀鉴定的相互作用蛋白是在细胞内与目的蛋白天然结合，符合体内实际情况，得到的蛋白可信度更高。

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二、串联亲和纯化/质谱（Tandem affinity purification，TAP/MS）
TAP-MS是Co-IP/MS的“近亲”，两者在寻找诱饵蛋白的互作蛋白以及纯化互作蛋白的原理方面非常相似。但是TAP-MS在常规Co-IP的基础上引入了2个标签（strep或SBP，flag），而COIP只有1步纯化。这样TAP/MS中靶蛋白及其复合物经过2个标签的2轮亲和纯化，可以使非特异性蛋白的数量降至较低的水平，将实验组和对照组的洗脱蛋白分别做质谱，再从实验组结果中扣除对照组中的蛋白，即可得到与靶蛋白互作的蛋白。

辉骏生物技术优势
1、TAP-MS得到的互作蛋白是在细胞内与诱饵蛋白结合的，符合体内真实生理情况，得到的结果可信度高。
2、采用两步纯化，可以有效的减少非特异蛋白的结合，并避免因过度冲洗而产生的复合体解离。

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三、SILAC应用之蛋白质互作实验服务
用SILAC (Stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC) 寻找相互作用蛋白是SILAC在定量蛋白质组学研究基础上的进一步应用。其基本原理是通过质谱鉴定和分析蛋白质相对量来判断是否是特异性结合诱饵蛋白，当实验组与对照组中某个蛋白质量含量达到统计学的差异时，就判定这个蛋白质与诱饵蛋白质具有相互作用。

辉骏生物技术优势
1、特异性强,假阳性极低；
2、高通量，液相与质谱连用，能最大限度的寻找到相互作用的蛋白质；
3、灵敏度高;
4、能直接检测出与bait蛋白互作的其它蛋白的相对含量。

四、iTRAQ实验技术服务
iTRAQ是一组能标记多肽N末端和赖氨酸侧链氨基的同位素试剂。在二级质谱前，每种iTRAQ标记的同一蛋白质表现为相同的理化性质和质荷比，保证了样本间的实验均一性。 而在二级质谱中，不同样本来源的信号离子表现为不同质荷比(113-119，121)的峰，因此可以根据波峰的高度及面积，分析出不同处理的蛋白定量信息。

iTRAQ技术特点
（1）灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白；
（2）分离能力强,分析范围广,iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白。
（3）能同时对8个样本进行分析，相对于SILAC而言，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析；
（4）结果可靠：定性与定量分析结果更加可靠；
（5）自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快。

服务优势
辉骏生物在液相途径的蛋白质组学方面具有强大的实力和丰富的经验。iTRAQ标记样本后通过液相分离与质谱连用，实现高通量的蛋白质定量分析。

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五、SILAC实验技术服务
SILAC即细胞培养条件下稳定同位素标记技术(Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC)，其基本原理是采用含有轻、中、重型同位素必需氨基酸的培养基培养细胞，同位素氨基酸被嵌入新合成的蛋白质。经5-6代培养后，蛋白质将被同位素完全标记上，等量混合后经过SDS-PAGE分离和质谱鉴定，便能鉴定出蛋白种类，同时能根据同位素峰型得到定量信息。

SILAC技术特点
（1）高效性：SILAC是体内标记技术，标记效率可高达100%；
（2）定量精确：细胞收集后便可混合不同处理的样本，彻底消除实验误差，定量可靠性甚至优于iTRAQ技术；
（3）高通量、灵敏度高：可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质，且检可测测到纳克级水平；
（4）相容性：可以对多种在DMEM或RPMI 1640培养基中能够培养的细胞或细菌中表达的蛋白进行标记；
（5）灵活性：在缺乏L-赖氨酸和L-精氨酸的培养基中添加同位素标记的这两种氨基酸，操作方便。

服务优势
公司在SILAC蛋白质组学服务方面具有多年经验，其中有顾客在蛋白质组学权威期刊J.Proteome Res.上发表的主体数据为本公司提供。

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六：Pull down实验技术服务
在pull-down实验中，带有标签的诱饵蛋白被特异结合该标签的固相化亲和配基捕获，产生“次级亲和支持物”，用于纯化与诱饵蛋白相互作用的其他蛋白。固相化诱饵蛋白的次级亲和支持物可以与含有推测猎物蛋白的各种蛋白样品相互孵育，如果缓冲液及样品条件与靶结合相互作用兼容，且诱饵蛋白在带有标签和被固相化时仍然可以行使功能，那么存在于样品中的猎物蛋白就会结合到亲和支持物上，“诱饵-猎物复合体”可从支持物上洗脱下来。


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