ET12567(pUZ8002)感受态细胞

ET12567(pUZ8002)感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: ET12567(pUZ8002), ET12567, ATCC BAA-525, ATCC BAA525
菌株类型: E.coli
产品目录号: ATCC BAA-525
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: F- dam-13::Tn9 dcm-6 hsdM hsdR zjj-202::Tn10 recF143 galK2 galT22 ara-14 lacY1 xyl-5 leuB6 thi-1 tonA31 rpsL136 hisG4 tsx-78 mtl-1 glnV44
抗性: 25 µg/ml 氯霉素和25 µg/ml 卡那霉素
质粒转化条件: 42 ℃热激/ 电转
应用: 链霉菌基因操作
诱导方法: --
菌株特点:
ET12567(pUZ8002)在培养的过程中加入25 µg/ml 氯霉素和25 µg/ml 卡那霉素有助于维持细胞内的伴侣质粒存在。

ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作过程中，利用结合转移的方法将基因导入到链霉菌中，链霉菌基因敲除或者基因倍增过程中全球通用和认可的菌株。

ET12567(pUZ8002)是甲基化缺陷型菌株。大部分链霉菌能够通过甲基修饰系统区分出自身DNA和外来DNA，所以需要转入到链霉菌中的质粒都必须利用ET12567(pUZ8002)通过结合转移的方法进入链霉菌体内。如果使用的链霉菌不含有甲基化修饰系统，那么使用DH5a(pUZ8002)菌株也是可以完成结合转移的。

pUZ8002质粒含有tra基因，能够编码转移蛋白Tra，从而实现基因DNA转移。

ET12567(pUZ8002)配套使用载体是pSET152和pKC1139.
ET12567(pUZ8002)感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
ET12567(pUZ8002)感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，ET12567(pUZ8002)感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。