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- 2025年07月14日
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- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
ET12567
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: ET12567(pUZ8002), ET12567, ATCC BAA-525, ATCC BAA525
菌株类型: E.coli
产品目录号: ATCC BAA-525
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: F- dam-13::Tn9 dcm-6 hsdM hsdR zjj-202::Tn10 recF143 galK2 galT22 ara-14 lacY1 xyl-5 leuB6 thi-1 tonA31 rpsL136 hisG4 tsx-78 mtl-1 glnV44
抗性: 25 µg/ml 氯霉素和25 µg/ml 卡那霉素
质粒转化条件: 42 ℃热激/ 电转
应用: 链霉菌基因操作
诱导方法: --
菌株特点:
ET12567(pUZ8002)在培养的过程中加入25 µg/ml 氯霉素和25 µg/ml 卡那霉素有助于维持细胞内的伴侣质粒存在。
ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作过程中，利用结合转移的方法将基因导入到链霉菌中，链霉菌基因敲除或者基因倍增过程中全球通用和认可的菌株。
ET12567(pUZ8002)是甲基化缺陷型菌株。大部分链霉菌能够通过甲基修饰系统区分出自身DNA和外来DNA，所以需要转入到链霉菌中的质粒都必须利用ET12567(pUZ8002)通过结合转移的方法进入链霉菌体内。如果使用的链霉菌不含有甲基化修饰系统，那么使用DH5a(pUZ8002)菌株也是可以完成结合转移的。
pUZ8002质粒含有tra基因，能够编码转移蛋白Tra，从而实现基因DNA转移。
ET12567(pUZ8002)配套使用载体是pSET152和pKC1139.
ET12567(pUZ8002)感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
ET12567(pUZ8002)感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，ET12567(pUZ8002)感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验Streptomyces:Protocols/Conjugation
Intergeneric Conjugation and Overlay Description Transfer of plasmid/cosmid DNA from a host strain, e.g. E.coli ET12567 [pUZ8002], to the recipient strain, e.g. Streptomyces coelicolor. Approx. Duration
, this method for preparing competent E. coli from Inoue et al. (1990) can challenge the efficiencies achieved by Hanahan (1983). However, under standard laboratory conditions, efficiencies of 1 x 108 to 3 x 108 transformed colonies/mg of plasmid DNA
to transform cells straight from plate.It is convenient but you should expect low efficiency.See the following reference for more details (as well as more information on competent cells and other protocols):本文引自：Hanahan et al,Methods in Enzymology 204,63
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