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- 2025年07月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
BL21(DE3)Star pLySs
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: BL21 Star(DE3)pLySs, BL21(DE3)Star pLySs
菌株类型: E.coli
产品目录号: C6020-03
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: BL21 Star(DE3)pLySs感受态细胞菌株基因型
抗性: 氯霉素
应用: 蛋白表达，IPTG诱导表达
菌株特点:
来源于BL21(DE3)菌株。
含有rne131基因突变体，rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。
主要适用于T7启动子载体的高水平蛋白表达。
含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
目的基因在菌株中的基础表达水平，一般是BL21 Star(DE3)要高于BL21 Star(DE3)pLySs，但是诱导后的总共的蛋白表达水平仍然是BL21 Star(DE3)要高于BL21 Star(DE3)pLySs。总得来说，目的基因的表达水平在BL21 Star(DE3)要高于在BL21 Star(DE3)pLySs中。
主要用来表达有毒蛋白或者对蛋白生长具有抑制作用的基因蛋白。
建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下：1. 你 在使用高拷贝的T7启动子载体进行蛋白表达。2.使用BL21 Star(DE3)进行蛋白表达时，你观察到明显的对细菌生长的抑制作用。3.你在表达一个已知的毒性蛋白。
BL21 Star(DE3)pLySs感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
BL21 Star(DE3)pLySs感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，BL21 Star(DE3)pLySs感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr 4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列
【交流】转载：JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别
子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－
） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr 4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列
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