Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞

Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞基本信息
感受态细胞名称: Rosetta-gami 2(DE3)pLysS, Rosetta-gami2(DE3)pLysS, Rosetta gami 2 DE3 pLysS, Rosetta-gami2 DE3 pLysS
菌株类型: E.coli
产品目录号: 71352-3, 71352-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: Rosetta-gami2(DE3)pLysS感受态细胞菌株基因型
抗性: 氯霉素，链霉素，四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点:
Rosetta-gami 2系列菌株是集合了Rosetta 2系列菌株和Origami 2系列菌株的有点，增强了细胞内二硫键的形成和含有在大肠杆菌中稀有密码子的真核细胞蛋白的表达能力。

Rosetta-gami 2(DE3)pLysS系列菌株是来源于Origami 2系列菌株。而Origami 2 系列菌株是卡那敏感的K-12细胞菌株，携带有TrxB和Gor基因突变提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。

本菌株含有pRARE2质粒，除了能够提供原Rosetta(DE3)宿主菌含有 的AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和GGA六个稀有密码子的tRNA外，还提供了第七个稀有密码子CGG的tRNA。同时，pRARE2质粒具有氯霉素抗性。通过提供原本在大肠杆菌中稀少 的真核细胞密码子，增加了真核细胞的在大肠杆菌中的蛋白表达水平。

Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞中的Gor基因突变使得菌株具有四环素抗性。

DE3是溶源性的 λDE3, 所以带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。

亮氨酸生长缺陷型菌株。
Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，Rosetta-gami 2(DE3)pLysS感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。