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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-70℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Rosetta Blue(DE3)pLysS
- 库存：
50
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20×100μl
感受态细胞名称: RosettaBlue(DE3)pLysS, Rosetta Blue(DE3)pLysS
菌株类型: E.coli
产品目录号: 71034-3, 71034-4
培养基: LB培养基
生长条件: 37 ℃, 有氧
基因型: RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞基因型
抗性: 氯霉素，四环素
质粒转化条件: 42 ℃热激
应用: 蛋白表达
诱导方法: IPTG
菌株特点: RosettaBlue系列菌株衍生于NovaBlue系列感受态细胞，该菌株既具有很高的转化效率，又具有recA endA lacIq 基因突变。对于包含有稀有密码子的真核蛋白，是加强型的蛋白表达菌株。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞通过细胞内一个兼容的具有氯霉素抗性的质粒，补充提供了AGG, AGA, AUA, CUA, CCC 和GGA这些大肠杆菌中真核细胞的稀有密码子的tRNA。这对于表达含有稀有密码子的真核细胞蛋白具有很大的促进作用。
DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。
RosettaBlue(DE3)感受态细胞无法使用蓝白斑筛选，因为在细胞中的DE3溶源噬菌体DNA序列上上含有LacZ的α肽段编码序列。
在RosettaBlue(DE3)pLysS细胞内，稀有的tRNA基因和T7溶菌酶基因存在于细胞内的同一个质粒上。
含有pLSs质粒，pLySs质粒能够产生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。
菌株是recA-, endA-, lacIq , 具有很高的质粒转化效率。
RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞操作方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上或室温融化。
2. 每100μl感受态加1ug质粒DNA混匀，依次于冰上静置10分钟、液氮5分钟、37℃ 5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μl无抗生素的2YT或LB液体培养基，于28℃振荡培养2~3小时。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的2YT或LB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
野生型E.coli并不容易转化，RosettaBlue(DE3)pLysS感受态细胞这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA。经过多年的努力，科学家们发现了一种方法可以增加细胞吸收外源DNA的效率。那就是用化学方法处理细胞，使其改变膜对DNA的通透性。这种细胞就称为感受态细胞，即细胞处于能摄入核酸分子时的生理状态。这种方法已经成为基因工程的常规技术，它对于我们利用体外DNA重组技术来了解真核和原核生物的基因功能特别重要。细菌的转化有两种类型：一种是自然转化（natural transformation），在自然转化中细菌可以自由地吸收DNA，通过它来进行遗传转化；另一种是工程转化（engineered transformation），在这种转化中，细菌发生改变使得它们能摄入并转化外源DNA。枯草杆菌中的转化属于自然转化，E.coli转化就属于工程转化。
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文献和实验）ply菌株 基因型： F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3） pLysS（cmR）. 特点： 该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性.此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达. 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达. 用途： 蛋白质表达.
ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cmR)。 特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。 适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。 用途：蛋白质表达 DH5α菌株 基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
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