- ¥998 - 3650
- 康朗生物
- CAT#: KL1002
- 中国/上海
- 2025年07月15日
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- 库存：
60
- 英文名：
DH5α λpir Chemically Competent Cell
- 保质期：
6个月
- 供应商：
上海康朗生物科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
100μl/支
DH5α λpir
DH5α λpir Chemically Competent Cell 产品说明书产品规格（CAT#: KL1002）
DH5α λpir： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存条件(保质期)： -80℃（6个月）
基因型
F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
产品说明
DH5α λpir菌株来源于DH5α，在DH5α大肠杆菌基因组中引入LAMpir，即为DH5α λpir，该菌株可以表达 PIR蛋白，使得含有R6Kg ori复制子的质粒可以在其中正常复制。 DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA 的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选；但DH5α λpir菌株生长速度较慢，在平板培养或液体摇菌时应延长生长时间。开发的DH5α λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×109 cfu/μg DNA。
操作方法
1. DH5α λpir感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏70分钟。
4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少18小时。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. DH5α λpir菌株生长缓慢，在平板上培养或液体摇菌时应延长菌体生长时间（37℃，18小时以上）。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验通过特殊转导作用导入参与乳糖发酵的基因的缺陷性λ噬菌体。 dg系 defective galactose-transdu-cingλ phage的缩写。它是一种转导噬菌体。由于λ噬菌体的 DNA和细菌染色体 DNA之间发生重组，细菌染色体上的控制乳糖代组的基因参入了λ噬菌体基因组中，而使噬菌体基因组的一部分丧失成为缺陷性噬菌体。因此，单独进行感染时不发生正常的噬菌体增殖。如用适当的方法使没有发酵乳糖能力的大肠杆菌溶原化，则该大肠杆菌便具有发酵乳糖的能力。
λ噬菌体的 DNA中有关增殖和调节的 4-5群基因在一起时才能独立地进行增殖。当有关头部或尾部形态形成等基因群全部缺失时，它们在细菌细胞内只能以质粒的形式存在并遗传给细菌细胞的后代。它可用于研究复制子的基本结构和了解增殖的调节机制等，此外也是理解噬菌体和质粒的关系的一种手段。 dv系 defective virulent（不能形成有感染能力的噬菌体）的缩写。
The preceding chapters describe the construction of genomic and cDNA λ libraries. In this chapter we describe two methods for screening libraries. The first method can be used on both genomic and cDNA libraries and screens by sequence homology
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